测序常用名词解释整理

高通量测序领域常用名词解释大全

什么是高通量测序？
高通量测序技术（High-throughput sequencing，HTS）是对传统Sanger测序（称
为一代测序技术）革命性的改变, 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测
定, 因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing，NGS )
足见其划时代的改变, 同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行
细致全貌的分析成为可能, 所以又被称为深度测序(Deep sequencing)。
什么是Sanger法测序（一代测序）
Sanger法测序利用一种DNA聚合酶来延伸结 合在待定序列模板上的引物。直到
掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构 成，每个
反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核
苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷
酸选择性 地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种
dNTPs和ddNTPs的相 对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链
终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不 同的的核苷酸上，可通过高分辨
率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X- 光胶片放射自显影或
非同位素标记进行检测。
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什么是基因组重测序（Genome Re-sequencing）
全基因 组重测序是对基因组序列已知的个体进行基因组测序，并在个体或群体
水平上进行差异性分析的方法。随 着基因组测序成本的不断降低，人类疾病的致
病突变研究由外显子区域扩大到全基因组范围。通过构建不 同长度的插入片段文
库和短序列、双末端测序相结合的策略进行高通量测序，实现在全基因组水平上检测疾病关联的常见、低频、甚至是罕见的突变位点，以及结构变异等，具有重
大的科研和产业价值 。
什么是de novo测序

de novo测序也称为从头测序：其不需要任 何现有的序列资料就可以对某个物种
进行测序，利用生物信息学分析手段对序列进行拼接，组装，从而获 得该物种
的基因组图谱。获得一个物种的全基因组序列是加快对此物种了解的重要捷径。
随着新 一代测序技术的飞速发展，基因组测序所需的成本和时间较传统技术都大
大降低，大规模基因组测序渐入 佳境，基因组学研究也迎来新的发展契机和革命
性突破。利用新一代高通量、高效率测序技术以及强大的 生物信息分析能力，可
以高效、低成本地测定并分析所有生物的基因组序列。




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测序名词关系图

什么是fragments
fragments 就是打成的片段，而测序测的就是这些fr agments，测出来的结果就
是reads，又可以分为单端侧和双端侧，单端测序的话，只是从f ragments的一
端测序，测多长read就多长，双端测序就是从一个fragments的两端 测，就会
得出两个reads
什么是Reads
高通量测序平台产生的序列就称为reads。
(测序读到的碱基序列片段，测序的最小单位；)
什么是Contig
拼接软件基于reads之间的overlap区，拼接获得的序列称为Contig（重叠群）。
(由reads通过对overlap区域拼接组装成的没有gap的序列段；)
什么是Contig N50
Reads拼接后会获得一些不同长度的Contigs。将所 有的Contig长度相加，能获
得一个Contig总长度。然后将所有的Contigs按照从长到 短进行排序，如获得
Contig 1，Contig 2，Contig 3...???Contig 25。将Contig按照这个顺序
依次相加，当相加的长度达到Con tig总长度的一半时，最后一个加上的Contig
长度即为Contig N50。举例：Contig 1+Contig 2+ Contig 3 +Contig 4=Contig
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总长度*12时，Contig 4的长度即为Contig N50。Contig N50可以作为基因组
拼接的结果好坏的一个判断标准。
什么是Scaffold
基因组de novo测序（没有参考基因组的测序，需要研究人员从头拼接得到的序
列），通 过reads拼接获得Contigs后，往往还需要构建454 Paired- end库或
Illumina Mate-pair库，以获得一定大小片段（如3Kb、6Kb、10 Kb、20Kb）两
端的序列。基于这些序列，可以确定一些Contig之间的顺序关系，这些先后顺
序已知的Contigs组成Scaffold。
(通过pair ends信息确定出的contig排列，中间有gap)
什么是Scaffold N50
Scaffold N50与Contig N50的定义类似。Contigs拼接组装获得一些不同 长度
的Scaffolds。将所有的Scaffold长度相加，能获得一个Scaffold总长度 。然
后将所有的Scaffolds按照从长到短进行排序，如获得Scaffold 1，Scaffold 2，
Scaffold 3...???Scaffold 25。将Scaf fold按照这个顺序依次相加，当相
加的长度达到Scaffold总长度的一半时，最后一个加上的 Scaffold长度即为
Scaffold N50。举例：Scaffold 1+Scaffold 2+ Scaffold 3 +Scaffold 4 +Scaffold
5=Scaffold总长度*12时，Scaffold 5的长度即为Scaffold N50。Scaffold N50
可以作为基因组拼接的结果好坏的一个判断标准。
什么是测序深度和覆盖度
测序深度：是指测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值。假设 一个基因大
小为2M，测序深度为10X，那么获得的总数据量为20M。
覆盖度：是指测序获得的序列占整个基因组的比例。
Gap：由于基因组中的高GC、重复序 列等复杂结构的存在，测序最终拼接组装获
得的序列往往无法覆盖有所的区域，这部分没有获得的区域就 称为。例如一个细
菌基因组测序，覆盖度是98%，那么还有2%的序列区域是没有通过测序获得的。

什么是RPKM、FPKM
RPKM,Reads Per Kilobase of exon model per Million mapped reads, is defined
in thisway [Mortazavi etal., 2008]:
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每1百万个map上的reads中map到外显子的每1K个碱基上的re ads个数。
假如有1百万个reads映射到了人的基因组上，那么具体到每个外显子呢，有多少映射上了呢，而外显子的长度不一，那么每1K个碱基上又有多少reads映射
上了呢，这大概 就是这个RPKM的直观解释。

如果对应特定基因的话，那么就是每1000000 mapped到该基因上的reads中每
kb有多少是mapped到该基因上的exon的read
Total exon reads:This is the number in the column with header Total
exonreads in the row for the gene. This is the number of reads that have
beenmapped to a region in which an exon is annotated for the gene or across
theboundaries of two exons or an intron and an exon for an annotated
transcript ofthe gene. For eukaryotes, exons and their internal
relationships are defined byannotations of type mRNA.映射到外显子上总
的reads个数。这个是映射到某个区域上的reads个数 ，这个区域或者是已知注
释的基因或者跨两个外显子的边界或者是某个基因已经注释的转录本的内含子、
外显子。对于真核生物来说，外显子和它们自己内部的关系由某类型的mRNA来
注释。
Exonlength: This is the number in the column with the header Exon length
inthe row for the gene, divided by 1000. This is calculated as the sum
of thelengths of all exons annotated for the gene. Each exon is included
only once inthis sum, even if it is present in more annotated transcripts
for the overlapping exons will count with their full length,
even though theyshare the same region.外显子的长度。计算时，计算所有某< br>个基因已注释的所有外显子长度的总和。即使某个基因以多种注释的转录本呈现，
这个外显子在求 和时只被包含一次。即使部分重叠的外显子共享相同的区域，重
叠的外显子以其总长来计算。
Mapped reads: The sum of all the numbers in the column with header
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Totalgene reads. The Total gene reads for a gene is the total number
ofreads that after mapping have been mapped to the region of the gene.
Thus thisincludes all the reads uniquely mapped to the region of the gene
as well asthose of the reads which match in more places (below the limit
set in thedialog in figure 18.110) that have been allocated tothis gene's
region. A gene's region is that comprised of the flanking regions(if it
was specified in figure 18.110), the exons, the introns andacross
exon-exon boundaries of all transcripts annotated for the gene. Thus,the
sum of the total gene reads numbers is the number of mapped reads for
thesample (you can find the number in the RNA-Seq report).map的reads总和。映射到某个基因上的所有reads总数。因此这包含所有的唯一映射到这个
区域上的rea ds。
举例：比如对应到该基因的read有1000个，总reads个数有100万，而该基因< br>的外显子总长为5kb，那么它的RPKM为：10^9*1000(reads个数)10^6(总re ads
个数)*5000(外显子长度)=200或者：1000(reads个数)1(百万)*5( K)=200这个
值反映基因的表达水平。
FPKM(fragments per kilobase of exon per million fragments mapped). FP KM
与RPKM计算方法基本一致。不同点就是FPKM计算的是fragments，而RPKM计< br>算的是reads。Fragment比read的含义更广，因此FPKM包含的意义也更广，
可以是pair-end的一个fragment，也可以是一个read。
什么是soft- clipped reads
当基因组发生某一段的缺失，或转录组的剪接，在测序过程中，横跨缺失 位点
及剪接位点的reads回帖到基因组时，一条reads被切成两段，匹配到不同的
区域 ，这样的reads叫做soft-clipped reads，这些reads对于鉴定染色体结
构变异及外源序列整合具有重要作用。
什么是multi-hits reads
由于大部分测序得到的reads较短，一个re ads能够匹配到基因组多个位置，
无法区分其真实来源的位置。一些工具根据统计模型，如将这类re ads分配给
reads较多的区域。
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什么是外显子测序（whole exon sequencing）
外显子 组测序是指利用序列捕获技术将全基因组外显子区域DNA捕捉并富集后
进行高通量测序的基因组分析方 法。外显子测序相对于基因组重测序成本较低，
对研究已知基因的SNP、Indel等具有较大的优势 ，但无法研究基因组结构变异
如染色体断裂重组等。
什么是mRNA测序 （RNA- seq）
转录组学（transcriptomics）是在基因组学后新兴的一门学科，即研究特定 细
胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA（包括mRNA和非编码RNA）的类
型与拷 贝数。Illumina提供的mRNA测序技术可在整个mRNA领域进行各种相关
研究和新的发现。 mRNA测序不对引物或探针进行设计，可自由提供关于转录的
客观和权威信息。研究人员仅需要一次试 验即可快速生成完整的poly-A尾的RNA
完整序列信息，并分析基因表达、cSNP、全新的转录 、全新异构体、剪接位点、
等位基因特异性表达和罕见转录等最全面的转录组信息。简单的样品制备和数 据
分析软件支持在所有物种中的mRNA测序研究。
什么是small RNA测序
Small RNA（micro RNAs、siRNAs和 pi RNAs）是生命活动重要的调 控因子，在
基因表达调控、生物个体发育、代谢及疾病的发生等生理过程中起着重要的作用。
I llumina能够对细胞或者组织中的全部Small RNA进行深度测序及定量分析等
研究。实验时首先将18-30 nt范围的Small RNA从总 RNA中分离出来，两端分
别加上特定接头后体外反转录做成cDNA再做进一步处理后，利用测序仪对 DNA
片段进行单向末端直接测序。通过Illumina对Small RNA大规模测序分析，可< br>以从中获得物种全基因组水平的miRNA图谱，实现包括新miRNA分子的挖掘，其
作用靶基 因的预测和鉴定、样品间差异表达分析、miRNAs聚类和表达谱分析等
科学应用。
什么是miRNA测序
成熟的microRNA（miRNA）是17~24nt的单链非编 码RNA分子，通过与mRNA相
互作用影响目标mRNA的稳定性及翻译，最终诱导基因沉默，调控着 基因表达、
细胞生长、发育等生物学过程。基于第二代测序技术的microRNA测序，可以一
次性获得数百万条microRNA序列，能够快速鉴定出不同组织、不同发育阶段、
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不同疾病状态下已知和未知的microRNA及其表达差异，为研究mic roRNA对细胞
进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。
什么是Chip-seq < br>染色质免疫共沉淀技术（ChromatinImmunoprecipitation，ChIP）也称 结合位
点分析法，是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具，通常用于转录因子
结合位点 或组蛋白特异性修饰位点的研究。将ChIP与第二代测序技术相结合的
ChIP- Seq技术，能够高效地在全基因组范围内检测与组蛋白、转录因子等互作
的DNA区段。
ChIP-Seq的原理是：首先通过染色质免疫共沉淀技术（ChIP）特异性地富集目
的蛋 白结合的DNA片段，并对其进行纯化与文库构建；然后对富集得到的DNA
片段进行高通量测序。研究 人员通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基
因组上，从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子 等互作的DNA区段信息。
什么是CHIRP-Seq
CHIRP-Seq( Chromatin Isolation by RNA Purification )是一种检测与RNA
绑定的DNA和蛋白的高通量测序方法。方法是通过设计生物素或链霉亲和素探
针，把目标RN A拉下来以后，与其共同作用的DNA染色体片段就会附在到磁珠
上，最后把染色体片段做高通量测序， 这样会得到该RNA能够结合到在基因组
的哪些区域，但由于蛋白测序技术不够成熟，无法知道与该RN A结合的蛋白。
什么是RIP-seq
RNA Immunoprecipitation 是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转
录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发 现miRNA的调节靶点。这种
技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA- 蛋白复合物沉淀下来，然后经过分
离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。
R IP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，但由于研究
对象是RNA- 蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物，RIP实验的优化条件与ChIP实
验不太相同（如复合物不需 要固定，RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有
RNA酶，抗体需经RIP实验验证等等）。RI P技术下游结合microarray技术被
称为RIP- Chip，帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变
化。
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什么是CLIP-seq
CLIP-seq,又称为HITS- CLIP，即紫外交联免疫沉淀结合高通量测序
(crosslinking- immunprecipitation and high-throughput sequencing), 是
一项在全基因组水平揭示RNA分子与RNA结合蛋白相互作用的革命性 技术。其
主要原理是基于RNA分子与RNA结合蛋白在紫外照射下发生耦联，以RNA结合
蛋 白的特异性抗体将RNA-蛋白质复合体沉淀之后，回收其中的RNA片段，经添
加接头、RT-PCR 等步骤，对这些分子进行高通量测序，再经生物信息学的分析
和处理、总结，挖掘出其特定规律，从而深 入揭示RNA结合蛋白与RNA分子的
调控作用及其对生命的意义。
什么是metagenomic（宏基因组）：
Magenomics研究的对象是整个微生 物群落。相对于传统单个细菌研究来说，它
具有众多优势，其中很重要的两点：(1) 微生物通常是以 群落方式共生于某一
小生境中，它们的很多特性是基于整个群落环境及个体间的相互影响的，因此
做Metagenomics研究比做单个个体的研究更能发现其特性；(2) Metagenomics
研究无需分离单个细菌，可以研究那些不能被实验室分离培养的微生物。 < br>宏基因组是基因组学一个新兴的科学研究方向。宏基因组学（又称元基因组学，
环境基因组学，生 态基因组学等），是研究直接从环境样本中提取的基因组遗
传物质的学科。传统的微生物研究依赖于实验 室培养，宏基因组的兴起填补了无
法在传统实验室中培养的微生物研究的空白。过去几年中，DNA测序 技术的进步
以及测序通量和分析方法的改进使得人们得以一窥这一未知的基因组科学领域。
什么是SNP、SNV（单核苷酸位点变异）
单核苷酸多态性singlenucleotide polymorphism，SNP 或单核苷酸 位点变异
SNV。个体间基因组DNA序列同一位置单个核苷酸变异(替代、插入或缺失)所引
起的多态性。不同物种、个体基因组DNA序列同一位置上的单个核苷酸存在差
别的现象。有这种差别的 基因座、DNA序列等可作为基因组作图的标志。人基因
组上平均约每1000个核苷酸即可能出现1个 单核苷酸多态性的变化，其中有些
单核苷酸多态性可能与疾病有关，但可能大多数与疾病无关。单核苷酸 多态性是
研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据。在研究癌症基因组变异时，
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相对于正常组织，癌症中特异的单核苷酸变异是一种体细胞突变（somatic
mutation），称做SNV。
什么是INDEL (基因组小片段插入）
基因组上小片段（>50bp）的插入或缺失，形同SNPSNV。
什么是copy number variation（CNV）：基因组拷贝数变异
基因组拷贝数变异是基因组变异的 一种形式，通常使基因组中大片段的DNA形
成非正常的拷贝数量。例如人类正常染色体拷贝数是2，有 些染色体区域拷贝数
变成1或3，这样，该区域发生拷贝数缺失或增加，位于该区域内的基因表达量也会受到影响。如果把一条染色体分成A-B-C-D四个区域，则
A-B-C-C-DA-C- B-C-DA-C-C-B-C-DA-B- D分别发生了C区域的扩增及缺失，扩
增的位置可以是连续扩增如A-B-C-C- D也可以是在其他位置的扩增，如
A-C-B-C-D。
什么是structure variation（SV）：基因组结构变异
染色体结构变异是指在染色体上发生了大片段的变异。 主要包括染色体大片段
的插入和缺失（引起CNV的变化），染色体内部的某块区域发生翻转颠换，两< br>条染色体之间发生重组（inter-chromosome trans- location）等。一般SV的
展示利用Circos 软件。
什么是Segment duplication
一般称为SD区域，串联重复是由序列相近的一些DNA片段串联组成。串联 重复
在人类基因多样性的灵长类基因中发挥重要作用。在人类染色体Y和22号染色
体上，有很 大的SD序列。
什么是genotype and phenotype
既基因型与表型；一般指某些单核苷酸位点变异与表现形式间的关系。
什么是转录本重构
用测序的数据组装成转录本。有两种组装方式：1，de-novo构建； 2，有参考
基因组重构。其中de-novo组装是指在不依赖参考基因组的情况下，将有overla p
的reads连接成一个更长的序列，经过不断的延伸，拼成一个个的contig及
sca ffold。常用工具包括velvet，trans- ABYSS，Trinity等。有参考基因组重
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构 ，是指先将read贴回到基因组上，然后在基因组通过reads覆盖度，junction
位点的信 息等得到转录本，常用工具包括scripture、cufflinks。
什么是genefusion
将基因组位置不同的两个基因中的一部分或全部整合到一起，形 成新的基因，
称作融合基因，或嵌合体基因。该基因有可能翻译出融合或嵌合体蛋白。
什么是表达谱
基因表达谱(geneexpression profile)：指通过构建 处于某一特定状态下的细
胞或组织的非偏性cDNA文库,大规模cDNA测序,收集cDNA序列片段 、定性、定
量分析其mRNA群体组成,从而描绘该特定细胞或组织在特定状态下的基因表达
种 类和丰度信息,这样编制成的数据表就称为基因表达谱
什么是功能基因组学
功能基因组学（ Functuionalgenomics）又往往被称为后基因组学
（Postgenomics）， 它利用结构基因组所提供的信息和产物，发展和应用新的
实验手段，通过在基因组或系统水平上全面分析 基因的功能，使得生物学研究
从对单一基因或蛋白质得研究转向多个基因或蛋白质同时进行系统的研究。 这
是在基因组静态的碱基序列弄清楚之后转入对基因组动态的生物学功能学研究。
研究内容包括 基因功能发现、基因表达分析及突变检测。基因的功能包括：生
物学功能，如作为蛋白质激酶对特异蛋白 质进行磷酸化修饰；细胞学功能，如
参与细胞间和细胞内信号传递途径；发育上功能，如参与形态建成等 。采用的
手段包括经典的减法杂交，差示筛选，cDNA代表差异分析以及mRNA差异显示等，
但这些技术不能对基因进行全面系统的分析，新的技术应运而生，包括基因表
达的系统分析（seri al analysis of gene expression,SAGE），cDNA微阵列（cDNA
microarray），DNA 芯片（DNA chip）和序列标志片段显示（sequence tagged
fragmentsdisplay。
什么是比较基因组学
比较基 因组学(ComparativeGenomics)是基于基因组图谱和测序基础上，对已知
的基因和 基因组结构进行比较，来了解基因的功能、表达机理和物种进化的学
科。利用模式生物基因组与人类基因 组之间编码顺序上和结构上的同源性，克隆
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人类疾病 基因，揭示基因功能和疾病分子机制，阐明物种进化关系，及基因组的
内在结构。
什么是表观遗传学
表观遗传学是研究基因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因表达了可遗 传
的变化的一门遗传学分支学科。表观遗传的现象很多，已知的有DNA甲基化
（DNAmet hylation），基因组印记（genomicimpriting），母体效应
（materna leffects），基因沉默（genesilencing），核仁显性，休眠转座子
激活和RNA 编辑（RNA editing）等。
什么是计算生物学
计算生物学是指开发和应用数据分 析及理论的方法、数学建模、计算机仿真技
术等。当前，生物学数据量和复杂性不断增长，每14个月基 因研究产生的数据
就会翻一番，单单依靠观察和实验已难以应付。因此，必须依靠大规模计算模拟
技术，从海量信息中提取最有用的数据。
什么是基因组印记
基因组印记(又称遗传印记) 是指基因根据亲代的不同而有不同的表达。印记基
因的存在能导致细胞中两个等位基因的一个表达而另一 个不表达。基因组印记
是一正常过程，此现象在一些低等动物和植物中已发现多年。印记的基因只占人< br>类基因组中的少数，可能不超过5%，但在胎儿的生长和行为发育中起着至关重
要的作用。基因组 印记病主要表现为过度生长、生长迟缓、智力障碍、行为异
常。目前在肿瘤的研究中认为印记缺失是引起 肿瘤最常见的遗传学因素之一。
什么是基因组学
基因组学（英文genomics），研究 生物基因组和如何利用基因的一门学问。用
于概括涉及基因作图、测序和整个基因组功能分析的遗传学分 支。该学科提供
基因组信息以及相关数据系统利用，试图解决生物，医学，和工业领域的重大问
题。
什么是DNA甲基化
DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组Cp G二核苷酸的胞嘧啶
5'碳位共价键结合一个甲基基团。正常情况下，人类基因组“垃圾”序列的CpG
二核苷酸相对稀少，并且总是处于甲基化状态，与之相反，人类基因组中大小
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为100—1000 bp左右且富含CpG二核苷酸的CpG岛则总是处于 未甲基化状态，
并且与56％的人类基因组编码基因相关。人类基因组序列草图分析结果表明，
人类基因组CpG岛约为28890个，大部分染色体每1 Mb就有5—15个CpG岛，
平均值为每 Mb含10．5个CpG岛，CpG岛的数目与基因密度有良好的对应关系
[9]。由于DNA甲基化与 人类发育和肿瘤疾病的密切关系，特别是CpG岛甲基化
所致抑癌基因转录失活问题，DNA甲基化已经 成为表观遗传学和表观基因组学的
重要研究内容。
什么是基因组注释
基因组注释(Genomeannotation) 是利用生物信息学方法和工具,对基因组所有基因的生物学功能进行高通量注释,是当前功能基因组学研究的一个热点。基因
组注释的研究内容包 括基因识别和基因功能注释两个方面。基因识别的核心是
确定全基因组序列中所有基因的确切位置。
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