-
附件
6
唾液酸检测试剂盒
(
酶法
)
注册技术审查指导原则
本指导原则旨在指导注册申请人对唾液酸检测试剂盒
(酶法)注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部
门审评注册申
报资料提供参考。
本指导原则是对唾液酸检测试剂盒
(酶法)
的一般要求,
申请人应依据产品的具体
特性确定其中内容是否适用,若不
适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品
的具
体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件,不
涉及注册审批等行
政事项,亦不作为法规强制执行,如有能
够满足法规要求的其他方法,也可以采用,但应
提供详细的
研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指
< br>导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认
知水平下
制定的,随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断
发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围
唾液酸检测试剂盒(酶
法)是指基于分光光度法原理,
利用全自动生化分析仪、半自动生化分析仪或分光光度计
,
对人血清、血浆或其他体液中的唾液酸含量进行体外定量分
析
的试剂。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》
(国家食品药品监
督管理总局令第
5
< br>号)和《食品药品监管总局关于印发体外
诊断试剂分类子目录的通知》
(食药监械管?
2013
?
242
号)
,
唾液酸检测试剂盒(酶
法)管理类别为
Ⅱ
类,分类代号为
68
40
。
目前唾液酸
< br>(SA)
含量的测定方法主要有比色法和酶法两
种方法。
比色法是一种直接测定方法,
如间苯二酚法、
< br>Ehrlich
法、色氨酸、过氧化氢法、氢氯酸和硫乙酸法等;酶法是一
种间接测定方法,国内常规检测为酶偶联速率法,一种是利
用丙酮酸氧
化酶的比色法,另一种是利用乳酸脱氢酶的紫外
分光光度法。
详情如下:
1.
丙酮酸氧化酶法
原理:血清中的
SA
受神经氨酸苷酶的作用,形成
p>
N-
乙
酰神经氨酸,进而在
N-
乙酰神经氨酸醛缩酶(
NANA-
醛缩
酶)
的作用下生成丙酮酸和
N-
乙酰甘露糖胺;
其中丙酮酸在
丙
酮酸氧化酶作用下生成
H
2
O
2
,
借助于
Trind
er
反应,
在
POD
< br>作用下生成有色醌,
引起
540nm
波长下吸光度的上升。
通过
测定其
540nm
波长下的吸光度变化,
与经过同样处理的校准
品比较,即可计算出样品中
SA
的含量。
p>
2.
乳酸脱氢酶比色法
原理:血清中的
SA
受神经氨酸苷酶的作用,形成<
/p>
N-
乙
酰神经氨酸,进而在
N-
乙酰神经氨酸醛缩酶(
NANA-
醛缩
酶)
的作用下生成丙酮酸和
N-
乙酰甘露糖胺;
其中丙酮酸与
NADH
在乳酸脱氢酶(
LDH
)作用
下生成乳酸和
NAD+
,引
起
340nm
波长下吸光度的下降。通过测定
34
0nm
波长下的
吸光度变化,与经过同样处理的校准品比较,即
可计算出样
品中
SA
的含量。该方法具
有快速准确、操作简便、微量、
灵敏、线性范围宽和结果稳定等优点,适用于全自动、半
自
动生化分析仪,更适用于中小型医院,具有较大的推广使用
价
值。
从方法学上讲,本指导原则是通过测定中间产物丙酮酸<
/p>
在酶作用下的氧化、还原反应,基于紫外分光光度法测定底
物消耗
或产物生成速率来反应样品中
SA
的含量。
二、注册申报材料要求
(一)综述资料
综述资料主要包括产
品预期用途、产品描述、方法学特
征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市
情况
介绍等内容,应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关
于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格
式的公告》
(国家食品药品监督管理总局公告
2014
年第
44
号)的相关要求。相关描述应至少包含如下内容:
1.
产品预期用途及辅助诊断的临床适应症背景情况
p>
(
1
)唾液酸的
生物学特征、结构与功能、在体内正常
和病理状态下的代谢途径和存在形式。
(
2
)与预期用途相关
的临床适应症背景情况,如临床
相关疾病的发生、实验室诊断方法等。
< br>
2.
产品描述
包括产品所采用的技术原理、主要原材料的来源、质量
控制及制备方法、
p>
主要生产工艺过程及关键控制点,
质控品、
校准品的制备方法及溯源情况。
3.
有关生物安全性方面的说明
p>
如果体外诊断试剂中的主要原材料采用各种动物、病原
体、人源的组
织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制
备而成,为保证产品在运输、使用过程中对
使用者和环境的
安全,研究者应提供对上述原材料所采用的灭活等试验方法
的说明。
人源性材料须对有关传染病
(
HIV
、
HBV
、
HCV
等)
病原体检测予以说明,并提供相关的
证明文件。
4.
有关产品主要研究结
果的总结和评价
5.
参考文献
6.
其他
包
括同类产品在国内外批准上市的情况,相关产品所采
用的技术方法及临床应用情况,申请
注册产品与国内外同类
产品的异同等。
(二)主要原材料的研究资料(如需提供)
< br>主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资
料;质控品(如产品包含)
、校准品(如产品包含)的原料
选择、制备、定值过程及试验资
料;校准品的溯源性文件,
包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。<
/p>
(三)
主要生产工艺及反应体系的研究
资料
(如需提供)
应包含产品的工艺
流程图和关键控制点、确定反应温
度、时间、缓冲体系比较等条件的研究资料、确定样本
和试
剂盒组分加样量的研究资料。
(四)分析性能评估资料
应至少包括
具体的研究方法、试验数据、统计方法、研
究结论等。性能评估时应将试剂和所选用的校
准品、质控品
作为一个整体进行评价,评估整个系统的性能是否符合要
< br>求。
性能评估应至少包括准确度、精密度、线性范围、
分析
特异性(抗干扰能力)
、其他影响检测的因素等。
1.
准确度
对测量准确度的评价依次包括:
与国家参考物
(和
/
或国
际参考物)的偏差分析、方
法学比对、回收试验等方法,申
请人可根据实际情况选择合理方法进行研究。
(
1
)与国家(国际)
参考物值的比对研究
如果研究项目有相应国家标准物质或国际
参考物质,则
使用国家标准物质或国际参考物质进行验证,计算检测结果
与靶值的相对偏差。
(
2<
/p>
)方法学比对
采用参考方法或国内
p>
/
国际普遍认为质量较好的已上市
同类试剂
作为参比试剂,与拟申报试剂同时检测一批患者样
品,至少
40
例样本,
40
例样本为在检测浓度范围
内不同浓
度的人源样品,且尽可能均匀分布。
在实施方法学比对前,确认两者都分别符合各自相关的
质量标准后方可进行比对
试验。方法学比对时应注意质量控
制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计
学分
析。
(
3
)回收试验
在人源样品中加入一定
体积标准溶液或纯品,按照产品
技术要求的要求和实验方法进行测试和计算。
2.
精密度
测量精密度的评估应至少包括生理和病理两个浓度水
平的样本进行。
p>
测量精密度的评价方法并无统一的标准可依,可根据不
同的试剂特征或申请人的研究习惯进行。
3.
线性范围
建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实
际检测的样本相似,理想的样本为
分析物浓度接近预期测定
上限的混合人血清,且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影
p>
响。
4.
分析特异性
应明确已知干扰因素对测定结果的影响:可采用回收试
验对不同浓度的溶血、黄疸、
脂血对检测结果的影响进行评
价,干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出
现的物质浓度。待评价的唾液酸样本浓度至少应为生理、病
理<
/p>
2
个水平,选取线性范围内有临床代表性意义的浓度。
药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或
选择何种药物及其浓度进行。
5.
其他需注意问题
(
1
)不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述
,
不同样本类型应分别进行分析性能评估。原则上,不同的试
剂
比例应分别提交分析性能评估报告。
分析性能评估报告应明确
所用仪器设备型号、校准品、
质控品等的产品名称、生产企业名称、生产批号或注册证等
信息。
(
2
)校准品溯源及质控品赋值
校准品、质控品应提供详细的量值溯源资料。应参照
GB/T
21415
—
2008
《体外诊断医疗器械
生物样品中量的测
量
校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求,提供
企业(工作)校准品及试
剂盒配套校准品定值及不确定度计
算记录,提供质控品赋值及其靶值范围确定的记录。<
/p>
(五)参考区间确定资料
参考区间确定所采用的样本来源、确定方法及详细的试
验资料。建议参考<
/p>
CLSI/NCCLS C28-A2
。
(六)稳定性研究资料
稳定性研究资
料主要涉及两部分内容,申报试剂的稳定
性和适用样本的稳定性研究。这里主要指试剂的
稳定性。通
常包括保存期稳定性(有效期)
、加速稳定性、开瓶
稳定性、
复溶稳定性等,申请人应提供保存期稳定性和开瓶稳定性、
加速稳定性研究资料,干粉试剂同时应提供复溶稳定性研究
资料(各
3
个生产批次)
。稳定性研究资料应包括研究方法
p>
的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论,
应涵盖产
品的所有主要性能指标,保存期稳定性研究,应提
供至少
3
p>
批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的性
能检测报告资料。
对待检测试剂做常规贮存稳定性研究以及冻干品复溶
后的稳定性试验。测定其在常规贮存条件下,按时间间隔进
行检测。
p>
(七)临床评价资料
< br>临床评价资料应符合《关于发布体外诊断试剂临床试验
技术指导原则的通告》
p>
(国家食品药品监督管理总局通告
2014
年第
16
号)要求,同时资料的形式应符合《体外诊断
试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》临床评价资料
有关的规定。
下面仅对临床实验中的基本问题进行阐述。
1.
研究方法
选择境内已批准上市的性能相近的同类产品作为对比
试剂,采用试验用体外诊断试剂与
之进行对比试验研究,证
明本品与已上市产品等效或优于已上市产品。建议企业尽量
p>
选择方法学相同、线性范围及精密度等性能接近的同类试剂
作为对比
试剂。
2.
临床研究单位的选择
应选择至少两家经国家食品药品监督管理总局资质认
可的临床试验机构,临
床试验机构实验操作人员应充分熟悉
检测系统的各环节(试剂、质控及操作程序等)
p>
,熟悉评价
方案。在整个实验中,考核试剂和参比试剂都应处于有效
的
质量控制下,定期对仪器进行校准、保养,最大限度保证试
验
数据的准确性及可重复性。
3.
临床试验方案
< br>临床试验实施前,研究人员应从流行病学、统计学、临
床医学、检验医学等多方面
考虑,设计科学合理的临床研究
方案。各临床研究机构的方案设臵应保持一致,且保证在
整
个临床试验过程中遵循预定的方案实施,不可随意改动。整
个
试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的
技术人员操作完成,申报单位的技
术人员除进行必要的技术
指导外,不得随意干涉实验进程,尤其是数据收集过程。
试验方案中应确定严格的病例纳入
/
排除标准,
任何已经
入选的病例再被排除出临
床研究都应记录在案并明确说明
原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法以
保
证试验结果的客观性。各研究单位选用的参比试剂及所用机
型
应保持一致,以便进行合理的统计学分析。
4.
研究对象选择
< br>临床试验应选择具有特定症状
/
体征人群作为研究对象。
企业在建立病例纳入标准时,应考虑到不同人群的差异,尽
量覆
盖各类适用人群。在进行结果统计分析时,建议对各类
人群分别进行数据统计分析。总体
样本数不少于
200
例,建
议异常值样
本数不少于
80
例。
如样本之间具有可比性,应完成一个样本类型不少于
200
例的临床研究,不少于
100
例同一受试者不同样本类型<
/p>
之间的比较,待测物浓度和量值范围要求同上。
血清
/
血浆应明确抗凝剂的要求、
存贮条件、
可否冻融等
要求及避免使用的样本。实验中,尽
可能使用新鲜样本,避
免贮存。
样本
中待测物浓度应覆盖考核试剂线性范围,且尽可能
均匀分布。
5.
统计学分析
对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法,如相关
分析、线性回归、绝对偏倚<
/p>
/
偏差及相对偏倚
/
偏差分析等。
对于对比实验的等效性研究,最常用是对考核试剂和参比试
剂两组检测结果的相关及线性回归分析,应重点观察相关系
数(
r
值)或判定系数(
R
2
)
、回归拟合方程(斜率和
y
轴截
距)等指标。结合临床试验数据的正
/
p>
偏态分布情况,建议统
计学负责人选择合理的统计学方法进行分析,
统计分析应可
以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究
方案中应明确统计检验假设,即评价考核试剂与参比试剂是
否等效的标准。
p>
6.
临床试验总结报告撰写
根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求,
临床试验报告应该
对试验的整体设计及各个关键点给予清
晰、
完整的阐述,
应该对整个临床试验实施过程、
结果分析、
结
论等进行条理分明的描述,并应包括必要的基础数据和统
计分析方法。建议在临床总结报
告中对以下内容进行详述。
6.1
临床试验总体设计及方案描述
6.1.1
临床试验的整体管理情况、
临床研究单位选择、
临
床主要研究人员简介等基本情况介绍。<
/p>
6.1.2
纳入
/
排除标准、不同人群的预期选择例数及标准。
6.1.3
样本类型,样本的收集、处理及保存等。
6.1.4
统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准。
6.2
具体的临床试验情况
6.2.1
考核试剂和参比试剂的名称、
批号、
有效期及所用
机型等信息;
6.2.2
对各研究单位的病例数、人群分布情况进行总合,
建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比。
6.2.3
质量控制,试验人员培训、仪器日常维护、仪器校
准
、质控品运行情况,对检测精密度、质控品回收(或测量
值)
、
抽查结果评估。
6.2.4
具体试验
过程,
样本检测、
数据收集、
样本长期
保存
等。
6.3
统计学分析
< br>6.3.1
数据预处理、
对异常值或离群值的处理、
p>
研究过程
中是否涉及对方案的修改。
6.3.2
定量值相关性和一致性分析
用回归分析验证两种试剂结果的相关性,以
y=a+bx
和
R2
的形式给出回归分析的拟合方程,其中
:
y
是考核试剂结
果,
x
是参比试剂结果,
b
是方程
斜率,
a
是
y
轴截距,
R2
是判定系数(通常要求
R
2≥0.95
)
,同时应给出
b
的
95%
(或
99%
)臵信区间。
建议给出考核试剂与参
比试剂之间的差值(绝对偏倚
/
偏差)
及比值
(相对偏倚
/
偏差)
散点图并作出
95%
臵信区间
分析。医学决定水平附近相对偏倚
/
偏差应不大于
10%
。
6.4
讨论和结论
< br>对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果,对本
次临床研究有无特别说明,
最后得出临床试验结论。
(八)产品风险分析资料
根据
YY/T 0316
—
2008
《医疗器械
风
险管理对医疗器械
的应用》
附录
D
p>
对该产品已知或可预见的风险进行判定,
企
业还应根据自身产品特点确定其他危害。针对产品的各项风
险,企业应采取应对措施,确
保风险降到可接受的程度。
(九)产品技术要求
拟定产品技术要
求应符合《体外诊断试剂注册管理办
法》和《体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明
文件格
式》以及《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的
通告》
(国家食品药品监督管理总局通告
2015
年第
9
号)的
相关规定。
下面就技术要求中涉及的产品适用的引用文件和主要
性能指标等相关内容作简要叙述。
1.
产品适用的相关文件
表
1
相关产品标准
GB/T
191
—
2008
GB/T
2828.1
—
2012
逐批检验抽样计划》
GB/T
2829
—
2002
《周期检验计数
抽样程序及表(适用于对过程稳定性的检验)
》
《包装储运图示标志》
《计数抽样检验程序
第
1
部分:
按接收质量限
(<
/p>
ALQ
)
检索的
《体外诊断医疗器械
生物样品中量的测量
校准品和控制物质
GB/T
21415
—
2008
赋值的计量学溯源性》
GB/T
26124
—
2011
YY/T
0316
—
2008
YY/T
0466.1
—
2009
部分:通用要求》
《体外诊断医疗器械
生物样品中量的测量
校准品和控制物质
YY/T
0638
—
2008
中酶催化浓度赋值的计量学溯源性》
《临床化学体外诊断试剂(盒)
》
《医疗器械
风险管理对医疗器械的应用》
《医疗器械
用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号
第
1
2.
主要性能指标
2.1
外观
应与技术要求中表明的试剂外观一致。这里可以包括试
剂盒包装外观、试剂内包装外观、
试剂的外观。
2.2
装量
试剂装量应不少于标示装量或规定限。
2.3
试剂空白吸光度
用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作
试剂作为样品测试时,
试剂空白吸光度应符合企业规定的要
求
(
例如:
37
℃
,
340nm
,
1cm
试剂空白吸光
度
≥0.800A)
。
2.4
试剂空白吸光度变化率
用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作
试剂作为样品测
试时,试剂空白吸光度变化率应符合企业规
定的要求
(
例如:
37
℃
,
340nm
,
1cm
,试剂空白吸光度变化
率
≤0.010A/min)
。
2.5
分析灵敏度
< br>用医学决定水平浓度或活性的样品进行测试,记录在试
剂(盒)规定参数下产生的
吸光度改变。换算为
n
单位反应
吸光度
差值
(
ΔA
)
或吸光度变化率,
应符合生产企业给定范
围。
< br>
2.6
线性范围
配臵成至少
5
个稀释浓度(
x
i
)且接近线性范围上限和
下限的
样本,分别测试试剂盒,每个稀释浓度测试
1
—
3
次,
分别求出测定结果的均值(
y
i
)
。以稀释浓度(
x
i
)为自变量,
以测定
结果均值(
y
i
)为因变量求出线性回
归方程。按公式
(
1
)计算线性回归的
相关系数(
r
)
。
r
?
?
p>
[(x
-
x
)(y
?
y
)]
?<
/p>
(x
-
x
)
p>
?
(y
-
y
)
i
i
2
i
i
2
……………………
………(
1
)
稀释浓度(
x
i
)代入求出线性回归
方程,计算
y
i
的估计
值及
y
i
与估计值的相对偏差
或绝对偏差。
线性范围应至少达到但不限于
10
mg/dL
—
180
mg/dL
(下限不得高于
10
mg/dL
,上限不得低于
180
mg/dL
)
。
2.6.1
相关系数(
r
)
线性相关系数
r
应
不小于
0.990
。
(线性范围下限应不低于产品的最低检测限,不高于参
考范围下限)
2.6.2
在
10 <
/p>
mg/dL
—
180mg/dL
范围内,线性绝对偏差或
线性相对偏差应不超过企业规定值。
2.7
测量精密度
2.7.1
重复性
< br>分别用试剂(盒)测试生理和病理两个浓度水平
(
例如:
-
-
-
-
-
-
-
-
-
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