关键词不能为空

当前您在: 主页 > 英语 >

唾液酸检测试剂盒酶法

作者:高考题库网
来源:https://www.bjmy2z.cn/gaokao
2021-02-26 10:26
tags:

-

2021年2月26日发(作者:xom)


附件


6




唾液酸检测试剂盒



酶法




注册技术审查指导原则



本指导原则旨在指导注册申请人对唾液酸检测试剂盒



(酶法)注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部


门审评注册申 报资料提供参考。



本指导原则是对唾液酸检测试剂盒


(酶法)


的一般要求,


申请人应依据产品的具体 特性确定其中内容是否适用,若不


适用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品 的具


体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。



本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件,不


涉及注册审批等行 政事项,亦不作为法规强制执行,如有能


够满足法规要求的其他方法,也可以采用,但应 提供详细的


研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指

< br>导原则。



本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认 知水平下


制定的,随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断

发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整。



一、适用范围



唾液酸检测试剂盒(酶 法)是指基于分光光度法原理,


利用全自动生化分析仪、半自动生化分析仪或分光光度计 ,


对人血清、血浆或其他体液中的唾液酸含量进行体外定量分


析 的试剂。



依据《体外诊断试剂注册管理办法》


(国家食品药品监


督管理总局令第


5

< br>号)和《食品药品监管总局关于印发体外


诊断试剂分类子目录的通知》

< p>
(食药监械管?


2013


?


242


号)



唾液酸检测试剂盒(酶 法)管理类别为



类,分类代号为


68 40




目前唾液酸

< br>(SA)


含量的测定方法主要有比色法和酶法两


种方法。


比色法是一种直接测定方法,


如间苯二酚法、

< br>Ehrlich


法、色氨酸、过氧化氢法、氢氯酸和硫乙酸法等;酶法是一


种间接测定方法,国内常规检测为酶偶联速率法,一种是利


用丙酮酸氧 化酶的比色法,另一种是利用乳酸脱氢酶的紫外


分光光度法。



详情如下:



1.


丙酮酸氧化酶法



原理:血清中的


SA


受神经氨酸苷酶的作用,形成


N-



酰神经氨酸,进而在


N-


乙酰神经氨酸醛缩酶(


NANA-


醛缩


酶)


的作用下生成丙酮酸和


N-


乙酰甘露糖胺;


其中丙酮酸在


丙 酮酸氧化酶作用下生成


H


2


O


2



借助于


Trind er


反应,



POD

< br>作用下生成有色醌,


引起


540nm

波长下吸光度的上升。


通过


测定其


540nm


波长下的吸光度变化,


与经过同样处理的校准


品比较,即可计算出样品中


SA


的含量。



2.


乳酸脱氢酶比色法



原理:血清中的


SA


受神经氨酸苷酶的作用,形成< /p>


N-



酰神经氨酸,进而在


N-


乙酰神经氨酸醛缩酶(


NANA-


醛缩


酶)


的作用下生成丙酮酸和

N-


乙酰甘露糖胺;


其中丙酮酸与


NADH


在乳酸脱氢酶(


LDH


)作用 下生成乳酸和


NAD+


,引



340nm


波长下吸光度的下降。通过测定


34 0nm


波长下的


吸光度变化,与经过同样处理的校准品比较,即 可计算出样


品中


SA


的含量。该方法具 有快速准确、操作简便、微量、


灵敏、线性范围宽和结果稳定等优点,适用于全自动、半 自


动生化分析仪,更适用于中小型医院,具有较大的推广使用


价 值。



从方法学上讲,本指导原则是通过测定中间产物丙酮酸< /p>


在酶作用下的氧化、还原反应,基于紫外分光光度法测定底


物消耗 或产物生成速率来反应样品中


SA


的含量。


二、注册申报材料要求



(一)综述资料



综述资料主要包括产 品预期用途、产品描述、方法学特


征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市 情况


介绍等内容,应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关


于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格


式的公告》

(国家食品药品监督管理总局公告


2014


年第

< p>
44


号)的相关要求。相关描述应至少包含如下内容:


1.


产品预期用途及辅助诊断的临床适应症背景情况




1


)唾液酸的 生物学特征、结构与功能、在体内正常


和病理状态下的代谢途径和存在形式。

< p>



2


)与预期用途相关 的临床适应症背景情况,如临床


相关疾病的发生、实验室诊断方法等。

< br>


2.


产品描述



包括产品所采用的技术原理、主要原材料的来源、质量


控制及制备方法、


主要生产工艺过程及关键控制点,


质控品、


校准品的制备方法及溯源情况。



3.


有关生物安全性方面的说明



如果体外诊断试剂中的主要原材料采用各种动物、病原


体、人源的组 织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制


备而成,为保证产品在运输、使用过程中对 使用者和环境的


安全,研究者应提供对上述原材料所采用的灭活等试验方法


的说明。


人源性材料须对有关传染病



HIV



HBV



HCV


等)


病原体检测予以说明,并提供相关的 证明文件。



4.


有关产品主要研究结 果的总结和评价



5.


参考文献



6.


其他



包 括同类产品在国内外批准上市的情况,相关产品所采


用的技术方法及临床应用情况,申请 注册产品与国内外同类


产品的异同等。



(二)主要原材料的研究资料(如需提供)


< br>主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资


料;质控品(如产品包含)


、校准品(如产品包含)的原料


选择、制备、定值过程及试验资 料;校准品的溯源性文件,


包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。< /p>



(三)


主要生产工艺及反应体系的研究 资料


(如需提供)



应包含产品的工艺 流程图和关键控制点、确定反应温


度、时间、缓冲体系比较等条件的研究资料、确定样本 和试


剂盒组分加样量的研究资料。



(四)分析性能评估资料



应至少包括 具体的研究方法、试验数据、统计方法、研


究结论等。性能评估时应将试剂和所选用的校 准品、质控品


作为一个整体进行评价,评估整个系统的性能是否符合要

< br>求。



性能评估应至少包括准确度、精密度、线性范围、 分析


特异性(抗干扰能力)


、其他影响检测的因素等。



1.


准确度



对测量准确度的评价依次包括:


与国家参考物


(和


/


或国


际参考物)的偏差分析、方 法学比对、回收试验等方法,申


请人可根据实际情况选择合理方法进行研究。

< p>



1


)与国家(国际) 参考物值的比对研究



如果研究项目有相应国家标准物质或国际 参考物质,则


使用国家标准物质或国际参考物质进行验证,计算检测结果


与靶值的相对偏差。




2< /p>


)方法学比对



采用参考方法或国内


/


国际普遍认为质量较好的已上市


同类试剂 作为参比试剂,与拟申报试剂同时检测一批患者样


品,至少


40


例样本,


40


例样本为在检测浓度范围 内不同浓


度的人源样品,且尽可能均匀分布。



在实施方法学比对前,确认两者都分别符合各自相关的


质量标准后方可进行比对 试验。方法学比对时应注意质量控


制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计 学分


析。




3


)回收试验



在人源样品中加入一定 体积标准溶液或纯品,按照产品


技术要求的要求和实验方法进行测试和计算。

< p>


2.


精密度



测量精密度的评估应至少包括生理和病理两个浓度水


平的样本进行。



测量精密度的评价方法并无统一的标准可依,可根据不

< p>
同的试剂特征或申请人的研究习惯进行。



3.


线性范围



建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实


际检测的样本相似,理想的样本为 分析物浓度接近预期测定


上限的混合人血清,且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影


响。



4.


分析特异性


应明确已知干扰因素对测定结果的影响:可采用回收试


验对不同浓度的溶血、黄疸、 脂血对检测结果的影响进行评


价,干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出


现的物质浓度。待评价的唾液酸样本浓度至少应为生理、病


理< /p>


2


个水平,选取线性范围内有临床代表性意义的浓度。

< p>


药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或

选择何种药物及其浓度进行。



5.


其他需注意问题




1


)不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述 ,


不同样本类型应分别进行分析性能评估。原则上,不同的试


剂 比例应分别提交分析性能评估报告。



分析性能评估报告应明确 所用仪器设备型号、校准品、


质控品等的产品名称、生产企业名称、生产批号或注册证等


信息。




2


)校准品溯源及质控品赋值



校准品、质控品应提供详细的量值溯源资料。应参照


GB/T


21415



2008


《体外诊断医疗器械



生物样品中量的测




校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求,提供


企业(工作)校准品及试 剂盒配套校准品定值及不确定度计


算记录,提供质控品赋值及其靶值范围确定的记录。< /p>



(五)参考区间确定资料


< p>
参考区间确定所采用的样本来源、确定方法及详细的试


验资料。建议参考< /p>


CLSI/NCCLS C28-A2




(六)稳定性研究资料



稳定性研究资 料主要涉及两部分内容,申报试剂的稳定


性和适用样本的稳定性研究。这里主要指试剂的 稳定性。通


常包括保存期稳定性(有效期)


、加速稳定性、开瓶 稳定性、


复溶稳定性等,申请人应提供保存期稳定性和开瓶稳定性、

加速稳定性研究资料,干粉试剂同时应提供复溶稳定性研究


资料(各


3


个生产批次)


。稳定性研究资料应包括研究方法


的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论,


应涵盖产 品的所有主要性能指标,保存期稳定性研究,应提


供至少


3


批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的性


能检测报告资料。



对待检测试剂做常规贮存稳定性研究以及冻干品复溶


后的稳定性试验。测定其在常规贮存条件下,按时间间隔进


行检测。



(七)临床评价资料


< br>临床评价资料应符合《关于发布体外诊断试剂临床试验


技术指导原则的通告》


(国家食品药品监督管理总局通告


2014


年第


16


号)要求,同时资料的形式应符合《体外诊断


试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》临床评价资料


有关的规定。 下面仅对临床实验中的基本问题进行阐述。



1.


研究方法



选择境内已批准上市的性能相近的同类产品作为对比


试剂,采用试验用体外诊断试剂与 之进行对比试验研究,证


明本品与已上市产品等效或优于已上市产品。建议企业尽量


选择方法学相同、线性范围及精密度等性能接近的同类试剂


作为对比 试剂。



2.


临床研究单位的选择


< p>
应选择至少两家经国家食品药品监督管理总局资质认


可的临床试验机构,临 床试验机构实验操作人员应充分熟悉


检测系统的各环节(试剂、质控及操作程序等)


,熟悉评价


方案。在整个实验中,考核试剂和参比试剂都应处于有效 的


质量控制下,定期对仪器进行校准、保养,最大限度保证试


验 数据的准确性及可重复性。



3.


临床试验方案


< br>临床试验实施前,研究人员应从流行病学、统计学、临


床医学、检验医学等多方面 考虑,设计科学合理的临床研究


方案。各临床研究机构的方案设臵应保持一致,且保证在 整


个临床试验过程中遵循预定的方案实施,不可随意改动。整


个 试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的


技术人员操作完成,申报单位的技 术人员除进行必要的技术


指导外,不得随意干涉实验进程,尤其是数据收集过程。



试验方案中应确定严格的病例纳入


/


排除标准,


任何已经


入选的病例再被排除出临 床研究都应记录在案并明确说明


原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法以 保


证试验结果的客观性。各研究单位选用的参比试剂及所用机


型 应保持一致,以便进行合理的统计学分析。



4.


研究对象选择


< br>临床试验应选择具有特定症状


/


体征人群作为研究对象。


企业在建立病例纳入标准时,应考虑到不同人群的差异,尽


量覆 盖各类适用人群。在进行结果统计分析时,建议对各类


人群分别进行数据统计分析。总体 样本数不少于


200


例,建


议异常值样 本数不少于


80


例。



如样本之间具有可比性,应完成一个样本类型不少于


200

例的临床研究,不少于


100


例同一受试者不同样本类型< /p>


之间的比较,待测物浓度和量值范围要求同上。



血清


/


血浆应明确抗凝剂的要求、

存贮条件、


可否冻融等


要求及避免使用的样本。实验中,尽 可能使用新鲜样本,避


免贮存。



样本 中待测物浓度应覆盖考核试剂线性范围,且尽可能


均匀分布。



5.


统计学分析


对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法,如相关


分析、线性回归、绝对偏倚< /p>


/


偏差及相对偏倚


/

偏差分析等。


对于对比实验的等效性研究,最常用是对考核试剂和参比试

< p>
剂两组检测结果的相关及线性回归分析,应重点观察相关系


数(

< p>
r


值)或判定系数(


R


2



、回归拟合方程(斜率和


y


轴截


距)等指标。结合临床试验数据的正


/


偏态分布情况,建议统


计学负责人选择合理的统计学方法进行分析, 统计分析应可


以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究


方案中应明确统计检验假设,即评价考核试剂与参比试剂是


否等效的标准。



6.


临床试验总结报告撰写



根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求,


临床试验报告应该 对试验的整体设计及各个关键点给予清


晰、


完整的阐述,


应该对整个临床试验实施过程、


结果分析、


结 论等进行条理分明的描述,并应包括必要的基础数据和统


计分析方法。建议在临床总结报 告中对以下内容进行详述。



6.1


临床试验总体设计及方案描述



6.1.1


临床试验的整体管理情况、


临床研究单位选择、



床主要研究人员简介等基本情况介绍。< /p>



6.1.2


纳入


/


排除标准、不同人群的预期选择例数及标准。


< p>
6.1.3


样本类型,样本的收集、处理及保存等。



6.1.4


统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准。



6.2


具体的临床试验情况



6.2.1


考核试剂和参比试剂的名称、


批号、


有效期及所用


机型等信息;



6.2.2


对各研究单位的病例数、人群分布情况进行总合,

< p>
建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比。



6.2.3


质量控制,试验人员培训、仪器日常维护、仪器校


准 、质控品运行情况,对检测精密度、质控品回收(或测量


值)


、 抽查结果评估。



6.2.4


具体试验 过程,


样本检测、


数据收集、


样本长期 保存


等。



6.3


统计学分析


< br>6.3.1


数据预处理、


对异常值或离群值的处理、


研究过程


中是否涉及对方案的修改。



6.3.2


定量值相关性和一致性分析



用回归分析验证两种试剂结果的相关性,以


y=a+bx



R2


的形式给出回归分析的拟合方程,其中 :


y


是考核试剂结


果,


x


是参比试剂结果,


b


是方程 斜率,


a



y


轴截距,


R2


是判定系数(通常要求


R 2≥0.95



,同时应给出


b



95%


(或


99%


)臵信区间。



建议给出考核试剂与参 比试剂之间的差值(绝对偏倚


/


偏差)


及比值


(相对偏倚


/


偏差)

< p>
散点图并作出


95%


臵信区间

分析。医学决定水平附近相对偏倚


/


偏差应不大于


10%




6.4


讨论和结论


< br>对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果,对本


次临床研究有无特别说明, 最后得出临床试验结论。



(八)产品风险分析资料



根据


YY/T 0316


< p>
2008


《医疗器械



风 险管理对医疗器械


的应用》


附录


D


对该产品已知或可预见的风险进行判定,



业还应根据自身产品特点确定其他危害。针对产品的各项风


险,企业应采取应对措施,确 保风险降到可接受的程度。



(九)产品技术要求



拟定产品技术要 求应符合《体外诊断试剂注册管理办


法》和《体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明 文件格


式》以及《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的


通告》


(国家食品药品监督管理总局通告


2015

< p>
年第


9


号)的


相关规定。



下面就技术要求中涉及的产品适用的引用文件和主要


性能指标等相关内容作简要叙述。



1.


产品适用的相关文件





1


相关产品标准



GB/T 191



2008


GB/T 2828.1



2012


逐批检验抽样计划》



GB/T 2829



2002


《周期检验计数 抽样程序及表(适用于对过程稳定性的检验)




《包装储运图示标志》



《计数抽样检验程序




1


部分:


按接收质量限


(< /p>


ALQ



检索的


《体外诊断医疗器械



生物样品中量的测量



校准品和控制物质


GB/T 21415



2008


赋值的计量学溯源性》



GB/T 26124



2011


YY/T 0316



2008


YY/T 0466.1



2009


部分:通用要求》



《体外诊断医疗器械



生物样品中量的测量



校准品和控制物质


YY/T 0638



2008


中酶催化浓度赋值的计量学溯源性》



《临床化学体外诊断试剂(盒)




《医疗器械



风险管理对医疗器械的应用》



《医疗器械



用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号




1



2.


主要性能指标



2.1


外观



应与技术要求中表明的试剂外观一致。这里可以包括试


剂盒包装外观、试剂内包装外观、 试剂的外观。



2.2


装量



试剂装量应不少于标示装量或规定限。



2.3


试剂空白吸光度



用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作


试剂作为样品测试时, 试剂空白吸光度应符合企业规定的要



(


例如:


37



340nm



1cm


试剂空白吸光 度


≥0.800A)




2.4


试剂空白吸光度变化率



用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作


试剂作为样品测 试时,试剂空白吸光度变化率应符合企业规


定的要求


(


例如:


37




340nm



1cm


,试剂空白吸光度变化



≤0.010A/min)

< p>



2.5


分析灵敏度


< br>用医学决定水平浓度或活性的样品进行测试,记录在试


剂(盒)规定参数下产生的 吸光度改变。换算为


n


单位反应


吸光度 差值



ΔA



或吸光度变化率,


应符合生产企业给定范


围。

< br>


2.6


线性范围


< p>
配臵成至少


5


个稀释浓度(


x


i


)且接近线性范围上限和


下限的 样本,分别测试试剂盒,每个稀释浓度测试


1



3


次,


分别求出测定结果的均值(

y


i



。以稀释浓度(

< p>
x


i


)为自变量,


以测定 结果均值(


y


i


)为因变量求出线性回 归方程。按公式



1


)计算线性回归的 相关系数(


r






r


?



?


[(x


-


x


)(y


?


y


)]


?< /p>


(x


-


x


)


?


(y


-


y


)


i


i


2

< p>
i


i


2


…………………… ………(


1




稀释浓度(


x


i


)代入求出线性回归 方程,计算


y


i


的估计


值及


y


i


与估计值的相对偏差 或绝对偏差。



线性范围应至少达到但不限于


10


mg/dL



180


mg/dL


(下限不得高于


10 mg/dL


,上限不得低于


180 mg/dL




2.6.1


相关系数(


r




线性相关系数


r


应 不小于


0.990




(线性范围下限应不低于产品的最低检测限,不高于参


考范围下限)

< p>


2.6.2



10 < /p>


mg/dL



180mg/dL


范围内,线性绝对偏差或


线性相对偏差应不超过企业规定值。

< p>


2.7


测量精密度



2.7.1


重复性


< br>分别用试剂(盒)测试生理和病理两个浓度水平


(


例如:

-


-


-


-


-


-


-


-



本文更新与2021-02-26 10:26,由作者提供,不代表本网站立场,转载请注明出处:https://www.bjmy2z.cn/gaokao/671766.html

唾液酸检测试剂盒酶法的相关文章