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组织病理切片制作流程(完整版)

作者:高考题库网
来源:https://www.bjmy2z.cn/gaokao
2021-02-28 03:15
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2021年2月28日发(作者:element是什么意思)


组织病理切片的制作流程



1




取材



组织取材的方法是制作切片的一 个重要程序,根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外


科手术切除标本、活检标本 、尸检标本)或动物,并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖


学、组织学、病理 学的基本理论知识,还要掌握实际操作技术,每个组织器官的取材都有一定的部


位和方法 ,不能任意切取组织作为制片材料,不然,无法达到教学、科研和临床诊断的目的,具体


要求如下:



(1)


材料新鲜:取材组 织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后迅


速固定,以保证原有的形态 学结构。



(2)


组织块的大小:所取 组织块较理想的体积为


2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液


能迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也不


同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取


0.1


0.2cm


即可,这样可以缩短


固定脱水透明的时间,若制作教学切片厚取


0.3



0.5cm


,这样可以同一蜡块制作出较


多的教 学切片。



(3)


勿挤压组织块


:


切取组织块用的刀剪要锋利,切割时不可来回锉动。夹取组织时


切勿过紧,以 免因挤压而使组织、细胞变形。



(4)


规范取材部位


:


要准确地按解剖部位取材,病理标本取材按照各病变部位、性质


的不同,根据 要求规范化取材。



(5)


选好组织块 的切面


:


根据各器官的组织结构,决定其切面的走向。纵切或横 切往


往是显示组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。



(6)


保持材料的清洁


:


组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲洗


干净后再放入固 定液中。



(7)


保持组织的原有形态


:


新鲜组织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完


全变形。为此可将组织展平,以尽可能维持原形。



2


.固定



( 1)


小块组织固定法:这是最常用的方法,从人体或动物体取下的小块组织,须立即


置入液态固定剂中进行固定,通常,标本与固定液的比例为


1:4< /p>



20


,但组织块不宜过


大过厚,否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为


2.0cm×2. 0cm×0.3cm。




1


(2)


注射、灌注固定法:某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入 内部,或需要对


整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将 固定液注入血


管,经血管分支到达整个组织和全身,从而得到充分的固定。



(3)


蒸汽固定法:比较小而厚的标本,可采用锇 酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片,


则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。



最常用的固定液有


10%

< p>
甲醛固定液和


95%


乙醇固定液。



3


.脱水透明


标本经过固定 和冲洗后,组织中含有较多的水分,必须将组织块内的水


分置换出来,这一过程叫做脱水 。无论是用石蜡切片,还是用火棉胶切片,都必须除去


组织中所含水分,因含水组织与石 蜡、火棉胶等包埋材料不相容,常用的脱水剂为一系


列不同浓度的乙醇。



脱水的步骤是:


80%


、< /p>


90%



95%



100%


各种浓度乙醇


2

< p>
小时,此过程可用脱水机自控


完成。


< p>
丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂,但因其脱水能力很强,对组织有剧烈收缩作

< br>用,在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡,还要经过

一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸


甲酯等。



4


.浸蜡、包埋


(1)


使石蜡浸入组织中,取代组织中含有的透明剂。


< /p>


(2)


包埋:


将浸蜡后的组织置于融化的 固体石蜡中,


石蜡凝固后,


组织即被包在其中,


称蜡块,此过程称为包埋。



5


.切片和贴片


(1)


修整蜡块:可视其组织的大小,在组织边缘约


0.1



0.2cm


处,切去余蜡部分,


否则易造成组织皱缩不平。



(2)


准备好切片用具:切片刀、毛笔、眼科镊子(弯)、漂烘温控仪



(3)


安装蜡块:将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。



(4)


安装切片刀:将切片刀安装在切片机 的刀台上,把刀台上的紧固螺丝旋紧,使切


片时不产生振动,能保持一定的切片厚度。< /p>



(5)


切片的厚度:切片机的厚度调节 器上刻有


0



50

μ


m



0



25


μ


m


, 可任意选择其


厚度,石蜡切片的厚度一般在


4

< br>~


6


μ


m




(6)


切片




2


(7)


铺片:

用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在


40


45


℃的水面上,


借水的张力和水的温

度,将略皱的蜡带自然展平。



(8)

贴片、烘片:待切片在恒温水面上充分展平后,将蜡片捞到载玻片的中段处倾去


载玻 片上的余水,


置入


60



65


℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片


15



30


分钟,


脱去溶化组织间隙的石蜡。



6


.染色 和封片


常用的染色方法是苏木素


-


伊红 (


Hematoxylin-Eosin


)染色法,简称


H.E


染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的 切片均可使用。苏


木素是一种碱性染料


,


可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色,如细胞核中的染色质等;伊


红是一种酸性染料,可 使组织中的嗜酸性物质染成红色,如多数细胞的胞质、核仁等在


H.E

< br>染色的切片中均呈红色。



H.E


染色程序如下


:


脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固



常规苏木素染色中的对比染色是用伊红


,


近年来在英、美国家的一些实验室则采用焰红


< p>
phloxine



,


此 外也有用桔黄


G



OrangeG


)、比布里希猩红


(Biebrich scarlet)


、波


尔多红


(Bordeaux


red)


等作为对比染色。伊红为染胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗


粒等常用的染料。



1 .


取材



取材的好坏,直接影响切片的质 量。医生在取材时,首先要有一把锋利的取材刀,


在切割组织时要避免取材刀来回拖拉, 切取的组织块厚薄要均匀,一般厚度以


0.2



0.3cm


为适,较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌 组织等可适当


厚一点,而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易 渗入的组织


应取薄一些;淋巴结应修掉两侧球冠,并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中 还应十分


注意组织内是否有缝线或骨组织,如碰到不可避免的钙化组织,应与技术室讲明 ,在切


取纤维组织、肌肉、组织、胃肠道时,应注意纤维及肌肉的走向,取材时尽可能按 与纤


维平行走向切取为佳。



2 .


固定



固定是技术室工作的第一步,< /p>


也是在整个制片过程中无法补救的一步。


所谓

“固定”



就是组织离体后,


用各 种办法使其细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位


置的过程。固定的目的是 为了防止组织细胞自溶与腐败,防止了细胞内的酶对蛋白质的


分解作用,


使细胞内的各和成分如蛋白质、


脂肪、


碳水化合物或酶 类转变为不溶性物质,


以保持原有的结构与生活时相仿。另外,组织固定后,均呈一定的 硬化状态,增加组织



3


韧性,而且 不易变形,有利于以后的组织处理。所以组织一旦离体必需及时固定,固定


液的量应为组 织的


5


倍。固定的关键主要与固定的及时性、固定液的选择、固 定液的浓


度、固定的温度和时间有关。最常用的固定液为


10< /p>


%福尔马林。笔者认为,


10


%福尔马< /p>


林由于受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入的水分影响,浓度被降低致组


织固定不足,而高浓度的福尔马林,降低了对组织的穿透性,形成周围固定好而中央固


定不到的现象。


通过实践,


本人认为以酸性< /p>


12



15


%的 福尔马林最佳。


大标本



2cm


厚)


一般需要


6


~< /p>


12


个小时,小标本一般需要


3



6


个小时;当室温低


18


℃时,可在


37


℃以


下的温箱内加温


4



6


个小时。由于


HE


染色最佳着色

< p>
PH



3.5



4.5,


中性福尔马林对


苏木素染色有一定影 响


,


细胞核容易发灰


,


核染色质不佳。


所以


,


尽管 中性福尔马林对抗


原有很好的保存作用,但酸性福尔马林对绝大多数抗原来说也有很好的 保存作用,所以


在没有特别处理的情况下常规


HE



12



15


%酸性福尔马林也可以


(每


100

< br>毫升


12



15



福尔马林液内加


5


毫升冰醋 酸)


。骨髓、结缔组织固定以


Bouin


液为佳,经


Bouin


液固


定后的组 织必须流水冲洗


4


小时以上。


有条件的 单位可根据不同要求选用二种或二种以


上的固定液;少数单位还可建立组织冷冻库,以便 适应各种特殊的处理要求。



3.


水洗



固定后水洗(

< br>10



20


分钟)


,通常被很多人所忽视,而水洗不彻底,


容易造成脱片和

染色不鲜艳。对需做免疫组织化学的组织,更不应当忽视。福尔马林不利于组织块内抗


原的保存



4 .


脱水和透明



所谓脱水就是利用脱水剂 将组织内的水分置换出来,以利于有机溶剂的渗入,这一


过程称为脱水。脱水是否彻底, 直接关系到组织是否能充分透明,而脱水过度(原因是


组织在纯酒精内时间过久,发生组 织质地发生变化)容易造成组织发脆。造成组织发脆


的原因还有加温(温度超过


35


℃)


、脱水剂内加有丙酮、浸蜡用的石蜡中 二甲苯过多等


等。一般我们总认为组织发脆跟高浓度酒精有关,而忽视了与低浓度的酒精 关系,其实


低浓度的酒精具有强大的穿透力,比纯酒精更容易渗透到组织块内部使之脱水 ,组织如


果在低浓度酒精里充分脱水,在高浓度酒精里只需脱去从低浓度到高浓度之间的 水份,


因此,仅需短时间就可完成,如果这时不缩短纯酒精的时间,便会引起组织发脆; 如果


脱水时加温,使用丙酮,还可引起组织收缩,并影响免疫组织化学的标记。为了使石 蜡


浸入到组织块内,必须经过一种既能与脱水剂混合,又能与石蜡相溶的媒介物质,这个


过程称透明。目前最好的透明剂是二甲苯。很多人认为二甲苯极容易使组织发脆,这个< /p>



4

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