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组织病理切片的制作过程
1
、
取材
取材的好坏,直接影响切片的质
量。首先要有一把锋利的取材刀,在切割组织时要
避免取材刀来回拖拉,切取的组织块厚
薄要均匀,一般厚度以
0.2
~
0.
3cm
为适,较容
易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结
、大块癌组织等可适当厚一点,而脂肪组
织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或
试剂不易渗入的组织应取薄一些;淋巴
结应修掉两侧球冠,并尽量剔除周围的脂肪组织。
在取材中还应十分注意组织内是否有
缝线或骨组织,
如碰到不可
避免的钙化组织,
应与技术室讲明,
在切取纤维组织、
肌肉、
组织、
胃肠道时,
应注意纤维及肌肉的走向,
取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。
具体要求如下:
(1)
材料新鲜:取材组织愈新鲜愈好,动物组织在处死后迅速固定,
以保证原有的形
态学结构。
(2)
组织块的大小:
所取组织块较理想的体
积为
2.0cm
×
2.0cm
×
0.3cm
,
以使固
定液能
迅速而均匀地渗入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较理想体积也
不同,
如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取
0.1<
/p>
~
0.2cm
即可,这样可以缩短固定脱
水透明的时间,若制作教学切片厚取
0.3
< br>~
0.5cm
,这样可以同一蜡块制作出较多的教学
p>
切片。
(3)
勿挤压组织块
:
切取组织块用的刀剪要锋利,
切割时不可来回锉动。
夹取组织时切
勿过紧,以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)
规范取材部位
:
要准确地按解剖部位取材,
病理标本取材按照各病变部位、
< br>性质的
不同,根据要求规范化取材。
(5)
选好组织块的切面
:
根据各器官的组织结构,决定其切面的走向。纵切或横切往往
是显示组织形态结构的关键,如长管状器官以横切为好。
(6)
保持材料的清洁
:
组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲洗干
净后再放入固定液中。
(7)
保持组织的原有形态
:
新鲜组
织固定后,或多或少会产生收缩现象,有时甚至完全
变形。为此可将组织展平,以尽可能
维持原形。
2
.固定
(1)
小块组织固定法:这是最常用
的方法,从人体或动物体取下的小块组织,须立即置入
液态固定剂中进行固定,
通常,
标本与固定液的比例为
1:4
~
20
,
但组织块不宜过
大过厚,
否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为
2
.0cm
×
2.0cm
×
0.3cm
。
(2)
注射、灌注固定法:某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内
部,或需要对
整个脏器或整个动物体进行固定。
这时宜采用注射
固定或灌注固定法。
将固定液注入血管,
经血管分支到达整个组
织和全身,从而得到充分的固定。
(3)
蒸汽固定法:比较小而厚的标本,可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片,<
/p>
则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。
最常用的固定液有
10%
甲醛固定液
和
95%
乙醇固定液。
3
.脱水
脱水透明标本经过固定和冲洗后,
组织中含有较多的水分,
p>
必须将组织块内的水分置
换出来,这一过程叫做脱水。无论是用石蜡
切片,
还是用火棉胶切片,
都必须除去组织中
< br>所含水分,
因含水组织与石蜡、
火棉胶等包埋材料不相容
,
常用的脱水剂为一系列不同浓
度的乙醇。
步骤:将固定的组织取出,依次经过:
50%
酒精(已保存在
70
%
的酒精中可省略)→
70%
酒精→
80
%
酒精→
90%
酒精→
95%
酒精→
100%
酒精(
两次)
,每级
35
-
< br>45
分钟,
100%
酒精第二次
可适当缩短时间。
丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂,
但因其脱水能力很强,
对组织有剧烈收缩作用,
在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙
酮等不溶于石蜡,还要经过一个能
溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二
甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。
酒精浓度越高组织越容易变脆,
时间不能太长。
每次从低浓度更
换到高浓度的酒精时,
要把组织块用吸水纸吸干。
4
.浸蜡、包埋
(1)
使石蜡浸入组织中,取代组织
中含有的透明剂。
(2)
包埋:将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中,石蜡凝固后,组织即被包在其中,
称蜡块,此过程称为包埋。
5
.切片和贴片
(1)
修整蜡块:可视其组织的大小
,在组织边缘约
0.1
~
0.2cm<
/p>
处,切去余蜡部分,否
则易造成组织皱缩不平。
< br>
(2)
准备好切片用具:切
片刀、毛笔、眼科镊子(弯)
、漂烘温控仪
< br>(3)
安装蜡块:将
修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器
上。
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