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血涂片及骨髓涂片的制作与读片
潘志强
2006-3-30
实验准备
一．器材：
载玻片：每只动物一块
盖玻片：每只动物一块
滴管：
4
个
橡皮吸头：
4
个
中号镊子：
4
把
< br>
大剪刀：
4
把
眼科镊：
4
把
玻璃棒：
4
根
烧杯：
1000
ml
，
2
个
量筒：
100ml
、
< br>500 ml
、
1000
ml
各一
蜡笔
棕色小口瓶
碾钵
载玻片处理：
< br>一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸
20
分钟，
用流水冲洗，
再经清洁液浸
泡过夜，用流水反复
冲洗，最后入
95%
酒精浸泡约
1
小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边缘擦
干备用。
< br>
二．试剂：
瑞氏染液
240ml
瑞氏染料粉剂
0.1g
纯甲醇（
AR
）
60ml
将粉剂放入洁净干燥碾钵内，
先加少量甲醇研磨使染料溶解，
然后将已溶解的染料倒入洁
净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此
反复，直至染料完全溶解为止。
新配制的染液需密封保存，室温放置
1
周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。
磷酸盐缓冲液
1%KH
2
PO
4
30ml
1%Na
2
HPO
4
20ml
加蒸馏水至
800 ml
，调
PH
值到
6.5~7.0
，定容至
1000ml
。
甲醇
鸡蛋
清：蒸馏水与鸡蛋清按
1/1
的比例稀释。
中性树胶：如果中性树胶过于粘稠，可将中性树胶与二甲苯按
7/3
的比例稀释。
二甲苯
1
实验步骤
一．涂片
（一）血液涂片的制作
（
1
）需载玻片
2
张，分别
称为玻片
1
和玻片
2
< br>（推片）
。
（
2
）用玻片
1
一端接约
3mm
直径的血滴，将此玻片
1
保持水平。
（
3
）取另一边缘平整的载玻片
2
（推片）
，将其前端放在血滴前，与片
1
保持
30
°角并稍向后
移与血滴接触，即见血液沿片<
/p>
2
（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。
（
4
）立刻将推片
与载玻片呈
30
°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推
动涂抹，至血
液铺完血膜为止。
（<
/p>
5
）挥动片
1
使
血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。
（
6
）每只动物涂片一张。
（
7
）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。
（
8
）置
30min
～
1hr
后
较利于观察红细胞的形态。
注意事项：
?
如标本本身太短，可观察的部分会
受局限，故以在离开载玻片另一端
2cm
地方涂抹为宜。
?
载玻片、
推片的角度越小、
血液越薄；
涂抹速度越慢
、
也越薄。
在涂抹贫血病人的血液时，
将推片稍竖起
（不
是
30
°而是
35
°～
40
°左右）
，以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。<
/p>
?
如用力过猛白细胞容易破损。
（二）骨髓涂片的制作
用手术剪刀剪掉大腿部的肌肉，充分暴露股骨，再用大剪刀从上端剪断第
2
股骨，用中号
镊子夹股骨以挤出骨髓，
如果骨髓不易取出，
可用直头眼科镊插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于
一载玻片上，由于骨髓液的纤维蛋白原含量较高，易于凝固，可先在骨髓液内加
5~
10
倍的稀
释后鸡蛋清，充分混匀，取
1
滴至另一载玻片上，涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并
迅速使之干燥。每只动物涂片一张。
二．染色
（一）血液涂片的染色
（
1
）将待染涂片平放于染色架上。
（
2
）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放
置
1
～
3
分钟
。
（
3
）加
入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，
混匀
为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色
5
～
10
分钟（白细胞数多或骨
髓标本时间应长一
些，如
20
～
30min
）
。
（
< br>4
）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。
（
5
）再将片子用自来水
温和冲洗，至血液膜呈淡红色。
（
6
）甩干或晾干玻片。
（
7
）封片。
（二）骨髓涂片的染色
同血液涂片。
2
附
1
：<
/p>
【染色原理】
1
．瑞氏染料
是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。
美蓝
（又
名亚甲蓝
mehyleme blue
）
为四甲基
硫堇染料，通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红（又名曙红
eosin
）通常为钠盐即伊红化钠。美蓝和伊红水
溶液混合
后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即瑞氏染料。瑞氏染料溶于甲醇后重新解离为
带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
2
．细胞的染色
既有物理性的吸附作用又有化学的亲和作用，各种细胞和细胞的各种成分化学性质不同对各种染
料的亲和力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以看见不同的色彩。
例如：
?
血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白，
与酸性染料伊红结合染成粉红色称为——
酸性物质
。
?
细胞核蛋白和淋巴
细胞浆为酸性，
与碱性染料美蓝或天青结合，
染蓝色或紫色称为
——
碱性物质
。
?
中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝
均可结合，染紫红色称为——
中性物质
。
3
．
PH
对细胞染色的影响
细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质
系两性电解质，所带电荷随溶液
PH
而定，在偏酸性
环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色
偏蓝，因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须清洁，配制瑞氏染液
必须用优质
甲醇，
稀释染液必须用缓冲液，
冲洗水应近中性，
否则各种细胞染色反应异常，
致使细胞的
识别困难，
甚至造成错误。
附
2
：
【血细胞发育
规律】
血细胞在分化成熟过程中，其形态和大小的变化基本上
有一个共同的规律：
1
．胞体：随着
血细胞的发育成熟，胞体由大逐渐变小，但巨核细胞系统则由小变大，原始粒细胞至
早幼
粒细胞也逐渐由小变大。
2
．胞核
（
1
）大小：由大变小，但红细胞系统例外，成熟红细胞核消失。
（
2
）形状
：圆形变为不规则形；粒细胞核呈分叶状；淋巴与浆细胞系统变化不大。
（
3
）染色质：细致、疏松逐渐变为粗糙、紧密。<
/p>
（
4
）核膜：
不明显变为明显；原淋巴细胞核膜最厚；原幼粒细胞核膜最薄；原始单核细胞介于两者
之
间。
（
5
）
核仁：由有至无。清楚的核仁是原始和比较原始细胞的重要标记，呈淡蓝色，随着细胞的成熟
而消失。
3
．胞浆
（
1
）量：有少到多。
（
2
）颜色：深蓝到浅蓝，见于淋巴细胞与浆细胞。红
细胞与粒细胞的胞浆各逐渐变成桔红和粉红色。
（
3
）颗粒：一般从无到少并逐渐增多。粒细胞系统由少量的嗜天青颗粒逐渐
代之以大量中性、嗜酸
和嗜碱颗粒。
（
4
）胞核与胞浆体积之比：由大到小。
3
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