实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法(详细)

(

用于细胞化学、免疫细胞化学 及原位

杂交细胞化学

)

。

二、细胞固定常用方法

固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，

避免

组织和细胞发生降解、

自溶、

腐败和变形等，

使细胞和组织内的各种酶失去活性，

防止细胞和组织的各种分子变性、

解离，

使细胞的化学物质和酶能准确定位，

并

在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。

同时，

固定还可使细胞的各部

分易于着色，适于观察、长期保存和分析 。

1.

固定组织、细胞的基本原则： 尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对

象、目的和要求选择固定剂和固定方法。

2.

培养物的准备和固定前处理：

各种细胞培养物，

如双盖片悬滴培养物、

悬< /p>

液培养物、

单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。

对双盖片悬滴培养物

和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，

PBS

漂洗

2

～

3

次后，备固定制片；

对盖片单层培养物来 说，将盖片从培养器皿中取出后，

PBS

液漂洗

2

～

3

次，以

洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。

3.

常用固定液：

常用的固定液分两类，

一 类是以单一化学物质配成的固定液，

称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙 酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、

重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇

(

锇酸

)

。另一类是用两种或两种 以上化学

物质配合成的固定液，称混合固定液。如

Muelle r

固定液、

Flemming

固液、< /p>

FAA

固定液、

Carnoy

固定液、

Rossman

固定液、

Altmann

固定液、

B ouing

固定液等。

不同的固定液对细胞的化学成分、

酶类及细胞结构固定效果不同。

因此，

选择合

适的固定液是达到固定目的的基础。

(1)4

％甲醛

-PBS:

甲醛是一种 气体，其饱和水溶液无色，约含

40

％甲醛。在

很多情况下，甲醛常常产生多聚甲醛的白色沉淀。

4

％ 甲醛

-PBS

使组织变硬速度

比乙醇快 ，

并能较好地保存组织的外部形式，

固定效果不受制片影响，< /p>

固定材料

可用苏木精和其他合成染料染色。

甲醛的穿透力较强，

对组织固定均匀，

能增强

组织的弹性，

大标本的固定和保存多用甲醛。

甲醛是染 色体、

线粒体和高尔基体

的固定液，在冷冻切片中，甲醛作固定 剂具有显著的优点。用

40

％甲醛水溶

液

:PBS=1:9

配方制备甲醛固定液。

(2)

丙酮：

丙酮为无色易挥发 液体，

用纯冷丙酮

(4

℃

)

固定细胞内酶效果较佳。

(3)

乙醇：乙醇又称酒精，固定血纤维蛋白、色素、弹性纤维、细菌和白细