抗原或抗体的检测

抗原或抗体的检测

一、检测的原理

借助抗原和抗体在体 外特异结合后出现的各种现象，

对样品中的抗原或抗体进行定性、

定量、定位的检测。

1

．抗原与抗 体的亲和力

(affinity)

抗原抗体的结合就像酶与底物 的结合，激素与其受体

的结合一样不是化学的反应，

而是非共价 键的可逆的结合。

抗原决定簇和抗体分子可变区互

补构型，

造成两分子间有较强的亲和力。

空间构型互补程度不同，

力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外， 反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗

体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的 影响，

抗体与抗原决定簇之间的结合力大小

可用亲合力来表示。

高亲合力的抗体与抗原的结合力强，

即使抗原浓度很低时也有较 多的抗

体结合抗原形成免疫复合物。

2

．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标< /p>

本中的抗原或抗体进行定性、

定位或定量的检测。

定性和定位检测比较简单，

即用已知的抗

体和待检样品 混合，

经过一段时间，

若有免疫复合物形成的现象发生，

就说明待检样品中有

相应的抗原存在。

若无预 期的现象发生，

则说明样品中无相应的抗原存在。

同理也可用已 知

的抗原检测样品中是否有相应抗体。

对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓

度 呈函数关系。

（

1

< br>）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应

条件下，加入的已知抗体

（或抗原）

的浓度一定，反应产生的免 疫复合物多少与待检样品中

含有相应抗原（或抗体）

量成正比。

也就是抗体浓度一定时，

免疫复合物越多则样品中的抗

原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原（或抗体）的含量。

如免疫单向扩散试

验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。

（

2

）抗原或抗体效价滴定 的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应

强弱时，

就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。

在实际工作中，

< br>把浓度低的反应

成分（抗原或抗体）

的浓度固定，把浓度 高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清

作抗原免疫

3

只家兔，

比较

3

只家兔产生抗体的多少，

即滴定

3

只 兔血清抗体效价，

可用双

向琼脂扩散法来滴定，

例如将抗体浓度固定，

将抗原作不同的稀释度，

分别将 抗原或抗体滴

入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅 的抗原稀释度

（如甲兔的抗体效价为

1/2000

，而丙免的是

1/8000

则可比较出后者比前者产 生抗体的效价

要高）

。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所 含待检成分越多。因人血清（抗原）和抗

体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原 。

二、抗原或抗体检测的实用意义

1

．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指 标。抗体用于临床治疗

或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。

临床上检测病人的抗病原生物的抗体、

抗过敏原

的抗体、抗< /p>

HLA

抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断 有重要意义。

2

．抗原检测的意义可 做为抗原进行检测的物质可分为以下四类：

（

1

）

各种微生物及其大分子产物：

用于传染病诊断、

微生物的分类及鉴定以及对菌苗、

疫苗的 研究。

（

2

）生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白（如各类免疫球蛋白、补体的各种

成分）

、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在

对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。

（

3

）人和动物细胞的表面分子：包括 细胞表面各种分化抗原（如

CD

抗原）

、同种异

型抗原（血型抗原或

MHC

抗 原）

、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。检测这些抗原对

各 种细胞的分类、

分化过程及功能研究、

对各种与免疫有关的疾病 的诊断及发病机制的研究，

均有重要意义。

< br>（

4

）各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属 于小分子的半抗原，可以分别

将它们偶联到大分子的载体上，

组 成人工结合的完全抗原。

用其免疫动物，

制备出各种半抗

原的抗体，

应用于各种半抗原物质的检测，

例 如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度

的监测。对运动员进行服用违禁药品的检测 ，都是应用半抗原检测的方法。

三、抗原或抗体检测的方法

由于各种 检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法

有下述几种：

（一）沉淀反应

< br>可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反

应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应（

precipita tion neaction

）

。

< /p>

1

．环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于< /p>

0.5cm

的小试管底部。

将稀释的含有 可溶性抗原的材料重叠于上，

让抗原与抗体在两液体的界面相遇，

形成白色免

疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验（

ring precipitationtest

）

,

此法简便易行，需用材料较

多是其缺点。

2

．单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验（

singl e

immunodiffusion

）是在凝胶中进行的

沉淀反应。

将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有 抗体的琼脂板，在适当

位置打孔，

将抗原材料加入琼脂板的小孔 内，

让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，

与琼脂中

的抗体相遇形成免疫复合物。

当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，

出现以小孔为中心

的圆形沉淀圈，

沉淀圈的 直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可

测定抗原的灵敏度

（最低浓度）

约为

10

～

20μg/ml

，

常用于定量测 定人或动物血清

IgG

、

IgM

、

IgA

和

C3

等，其缺点是需

1

～

2

天才能看结果（图

1

）