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R&D
常见问题之
ELISA
酶联吸附免疫法
问：人的
Quantikine
ELISA
试剂盒是否有相关的对照？
答：
R&D
Systems
为人的
Quantikine
ELISA
试剂盒
< br>提供三重对照组。请同我们联系以便确
定产品的目录号。
问：我想使用你们目录中的重组蛋白作为我的
ELISA
的对照，但我发现质量上
有差异。这
是为什么？
答：
首先要考虑的是重组蛋白的质量会高出试剂盒的可测试范围数倍，
必须将
重组蛋白稀释
多次才能得到试剂盒的测试范围。一般来说是从
m
g/
毫升稀释到
pg/
毫升，在这中间
光是
移
液管
的误差就达到了可测量的水平。
其
次要考虑的是
R&D Systems
的免疫测试方法测量的蛋白水平是用一种抗体捕获的、用第
二种抗体测定的，
这种测定是在试剂盒研发时与标准蛋白校正过的。
这些经过测定的早期
标
准蛋白成为基本校正物，
后来的标准都同它校正。
这样不同生产批号的免疫测定试剂盒将是
一致的。这些基本校正物蛋白质量的测量方法也许与你的试剂管中蛋白
质量的测定方法有
所不同。
问：什么是竞争性
ELISA?
答：
< br>竞争
ELISA
基于竞争结合技术，
即样本中的待测分子与固定量的标记的同样分子
（我们
一般
用碱性
磷酸酶
作为标记）同时与固定
在孔板上的抗体的同一结合位点进行竞争，参照
标准曲线，试验数据值是定量的。
问：什么是夹心
ELISA
？
答：
夹层
ELISA
采用对样本中分析物的特异的抗体作为固定化的捕获
抗体，
然后用第二个带
标记的抗体作检测，
检测抗体对分析物也是专一的。
当参照标准曲线时，
试验数
据值是定量
的。
问：什么是直接
ELISA
？
答：直接
ELISA
是将被测的分析物直接包膜在
微孔板
表面，然后用测试抗体来证实被测分
析物的存在。当
与重组蛋白（标准曲线）进行参照时，试验数据值是半定量的。
问：
R&D Systems
Parameter
品牌的
ELISA
试剂盒可以做多少个样本？
答：
R&D Systems Parameter
品牌的
ELISA
试剂盒可以做
< br>6
点的标准曲线、对照和
41
个
样
本（每个样本做双份）。
问：
R&D
Systems
的
Quantikine
品牌人的
ELISA
试剂盒可以做多少个样本？
答：大多数
R&D
Systems
的
Quantikine
品牌人的
ELISA
试剂盒可以做标准曲线、对照和
40
个样本（每个样本做双份）。
问：
R&D
Systems
的
Quantikine
品牌的小鼠、大鼠和猪的
ELISA
试剂盒可以做多少个
样本？
答：
Quantikine
品牌的小鼠或大鼠的
ELISA
试剂盒中的每一
微孔板
可以做标准曲线、对照
和
39
个样本（每个样本做双份）。
Quantikin
e
品牌的小鼠或大鼠的
ELISA
试剂
盒中，有些
有两个微孔板，有些只有一个微孔板。
问：
R&D
Systems
建议用什么样的
ELISA
微孔板来做
DuoSets
和抗体配对实验？
答：在
R&D Systems
本部，
我们用
Costar
的微孔板（目录
#
2592
）。
Costar
的电话是<
/p>
(800)492-1110
。
问：
R&amD Systems
用什么纯度的
A
做
ELISA
？
答：为了
ELISA
，我们采用
Serological
Protei
的
A
（目录<
/p>
#82-045
）。
Serologic
al
Protei
的电话是
(815
)937-8270
。
问：
Quantikine
ELISA
试剂盒里都包括什么？
答：
R&D
Systems
的
Quantikine ELISA
试剂盒是一个完整的试剂盒。它包含了一个已包板
的微孔板、酶标抗体、
标准蛋白、稀释剂、底物、终止剂、洗液和微孔板密封膜。所有试剂
盒对实验说明书中所
列样本都经充分验证，确保高质量。
问：什么是
DuoSet
？
答：
DuoSet ELISA
开发系
统提供了足够的捕获抗体、测试抗体、标准蛋白和
Streptavidin-HRP<
/p>
，
可以做大约十五个
96
孔微孔板的实验。
我们还提供了样
< br>本试验流程和
与这一系统配套的试剂。
DuoSet E
LISA
开发系统主要是为高通量筛选细胞培养的上清液所
设计
，但熟悉
ELISA
研发的实验人员已成功将其推广到
血清
和血浆样本的使用。
问：什么是
R&D
Systems
的抗体配对？
答：
R&D
Systems
的抗体配对是一个自己动手的产品。
R&D S
ystems
建议此产品的使用者在
免疫测试的开发方面应很有
造诣。
使用者必须以经验为依据来决定捕获抗体和测试抗体的最
佳浓度。
R&D
Systems
的重组
细胞因子
并未经
ELISA
校正，所以在使用前必须
经
ELISA
做
质量校正。更多有关<
/p>
ELISA
开发的信息可参照我们的《
E
LISA
开发指导》
(
网
站
:
/tsg_detail_objectna
me_elisa_
)
。
问：
Quantikine
和
QuantiGlo
ELISA
试剂盒有何不同？
答：
R&D Systems
的
Quantikine
牌子的
ELISA
试剂盒是一种比色法检测，需要一台标准读
光仪配备有合适的滤光片
可用于读数和光波长校正。
QuantiGlo ELISA
试剂盒采用了一种
荧光底物，计数为光流明或相对光单位
(RL
U)
。因此，
QuantiGlo ELISA
试剂盒需要有荧光
读光仪。
这种荧光读光仪需设置在：
1.0
分钟的滞待时间；
1.0
秒
/
孔的读数时间；
累计状态；
自动获取开启。
R&amD
Systems
使用
Dynex
Technologies
的荧光读光仪。
问：普通
Quantikine
ELISA
试剂盒同高灵敏
Quantikine ELISA
试剂盒有何不同？
答：
高灵敏
Quantikine <
/p>
ELISA
试剂盒一般用于非常低量的
细
胞因子
的检测，
比如正常人
（健
康状态时）
的
血清
和血浆。当普通
Quantikin
e
试剂盒一般检测不到
（或几乎检测不到）
正
常人血清和血浆中的细胞因子，可选择高灵敏
Quant
ikine
。我们建议实验者先查阅文献资
料来确定试验的测试
范围以选择所需的试剂盒的种类。
问：
R&D
Systems
的
Quantikine
试剂盒是否可
用于组织匀浆
（或其它未经检验的）
样本？
答：
很遗憾，
R&D
Systems
尚未采用组织匀浆作为样本对
Quantikine
系列的试剂盒做效果
验证。如果要决定试剂盒是否可用于未经检定的样本，实验
者最好先做一个
“掺入和回收
预试验
”。
简单来说，实验者将样本分为两份：一份中掺入一定量的试剂标准，然后做一稀
释系列（一般稀释到
1:16
），再将掺入
过的一份同未掺
入的一份相比。采用以下的公式来
计算回收率（
%
）：测试值（
pg /
毫升）
/
期待值（
pg
/
毫升）
x 100% = %
回收
率。一般来
说，回收率在
80-120%
可认为是可接受的。但是，可接受范围应由每一实验室自行决定。这
种方法可用于检定
未被
R&amD Systems
检定的任何样本。我们还有更
加详细的“掺入和回
收”的实验步骤，
可向我们的技术服务部索
取。
我们也可进一步查阅文献看一看是否有其他
试验人
员用我们的产品做过不同的样本，或不同的属种。
问：加入稀释剂是否会将样本进一步稀释？
< br>答：
因为稀释剂是加入到所有的孔中，
标准和被测样本都
被同样稀释，
所以样本的浓度可从
标准曲线读出，而不需作稀释
调整。
问：我是否可将标准曲线的两端延伸？