关键词不能为空

当前您在: 大学查询网 > 高校介绍 >

山西师范大学政法学院信阳水牛GHRH基因第二外显子的SNPs检测

作者:高考题库网
来源:https://bjmy2z.cn/daxue
2020-11-27 23:58
tags:

华中师范大学招生信息网-华中师范大学招生信息网

2020年11月27日发(作者:于炼)


中国牛业科学2012,38(4):1-5 


Chi

n a Catt

le Sci

ence 

科学试验 


信阳水牛GHR 

H基因第二外显子的SNPs检测 


徐永杰  ,吴海港 ,姚 瑾 。,刘 英 ,梁小娟 ,马 云¨ 


(1.信阳师范学院生命科 学学院,

河南信阳464000;

2.信阳农业高等专科学校,河南信阳4640 00;

 


3.江苏大学生命科学学院,江苏镇江212013;

 


摘 要:[目的]检测信阳水牛群体GHRH基因的SNP多 态性。[方法]以56头信阳水牛为 


材料,采集血样,提取基因组DNA,以GenB ank公布的牛GHRH基因(gi:194719389)序列 


作为参照序列,设计 PCR引物,采用PCR—SSCP和DNA测序方法对该基因第二外显子的 


进行突变 检测。[结果]经SSCP分析发现,这些个体总共出现六种不同的带型。测序结果 


表 明:位于GHRH基因的4 461

 bp、4 529 bp、4 845

 b p、5

 053 bp和5 058 bp处分别存在C 


—T、T—G 、G—A、G—A和G—T五个单核苷酸突变。[结论]表明该基因在信阳水牛群体 


中 单核苷酸多态较为丰富。

 


关键词:信阳水牛;GHRH基因;SNPs ;PCR—SSCP 


中图分类号:¥823.2 

文献标识码:A < /p>

文章编号:1001—9111(2O12)04—0001-05 


然而 ,近年来信阳水牛的存栏数呈现快速、持续 


引言 


下降趋势, 加之信阳水牛饲养业得不到应有的重视,

 


信阳水牛主产于河南省信阳市 ,中心产区为信 


科技普及力度不够,饲养周期长、经济效益低,群众 


阳市的光山、罗山、固始、商城、新县等县区[

]。信阳 

< p>的养牛积极性不高;而且信阳水牛品种分布不合理,

 


水牛属牛科、 水牛属,于1983年被列入《河南省地 

对于一些引进的品种在分布上也不能形成规模,原 < /p>


方优良畜禽品种志》,2003年被列人《中国畜禽遗传 


始的放 牧式养牛方法还普遍存在;品种结构不合理,

 


资源名录》,体型较大、 体质结实、结构匀称,胸宽深,

 

缺乏龙头企业带动,没有形成产业化经营,这些 禁锢 


肋骨开张良好,背平直而宽,尻宽广而倾斜,而且性 


着 水牛业发展的诸多问题亟待解决 ]。因此,在分 


情温驯、喜水、繁殖性能、适应性强 ,耐粗饲l

_

],这些 


子水平上运用 现代技术对信阳水牛进行遗传育种改 


优点使得信阳水牛在役用方面备受推宠。随着农业  


良以促进水牛业的发展,具有极其重要的意义。生 


机械化水 平的不断提高和农业现代化的逐步实现,

 


长激素释放激素(growt

h hormone

 rel

easi

ng ho r—

 


信阳水牛的经济用途已逐步从单纯的役用向乳、肉 


mone,

GHRH)是下丘脑合成和分泌的小分子蛋白,

 


方向转化。信阳水牛肉质较好,在营养价值很高的 


是一种直接或间接的 免疫功能状态下维持生理和病 


牛肉中占有很大的比例;其水牛奶浓稠、清香,没有 < /p>


理的下丘脑激素 ],是促进生长激素分泌的重要的 


膻味,营养 价值很高,总固形物达2O ,是普通牛奶 



种正性调控因子 。牛的下丘脑分泌的GHRH有 


1.7倍,蛋白质达4.5 ,比普通牛奶高出1.3 个百 


3种形式,分别由44、4O、37个氨基酸组成。研究证 

分点,而且水牛奶中钙、铁、磷、维生素A、维生素E 


明这3种GHRH均具有生 物活性,其中以44肽的 


等含量非常丰富

,是老幼皆宜营养食品,水牛 奶将 


活性最高,Barendsec

 利用基因连锁分析法把牛的 < /p>


成为消费新宠【

]。由此可见,信阳水牛有着举足轻 < /p>


GHRH基因定位于13号染色体上,并证明牛的 


重的价值性和 极好的发展潜力。

 


GHRH基因由5个外显子和4个内含子组成_

 ,对 


收稿日期:

2012—

< p>04—

04

修回日期:

2012—

04—16

 


基金项目:

河南省科技攻关项目(092300410 010);

河南省高等学校骨干教师资助计划 


作者简介:

徐永杰(1980一),

男,

河南商城县人,

讲师,

< p>主要从事动物分子遗传研究。

 


*通讯作者:马

云( 1974一

),男,宁夏平罗县人,副教授,

主要从事动物分子遗传育种研究。< /p>

 


 

中国牛业科学 

第3 8卷 


普通牛GHRH全基因测序得到的基因全长为9 356 


1.1.2 主要试剂 Gol

den DNA聚合酶(Pol

ymer—

 


ase)、2×Reacti

on Mi

x 、dNTP、Marker

 DL2000、琼 


bp_

]。GHRH基因具有多种极其重要的作用,其主 


要功能是诱导并刺 激垂体促生长区的细胞合成和释 


放生长激素。通过注射GHRH刺激牛、羊、猪、猴 


和犬的研究表明,GHRH

的促

GH释放活性较 


高 。 。此外,GHRH在其他方面也有不可或缺的 


作用,例如: GHRH有助于

HI

V患者骨骼的增 


强l

 ;GHRH还具有免疫调节的功能I

 。

 


脂糖、Tri

s饱和酚、蛋白酶K等购自郑州久是生物 


技术有限责任公司;

其他试剂均为国产分析纯;引物 


合成和 测序由南京金斯瑞生物科技有限公司。

 


1.1.3 主要实验仪器

PCR仪(型号:Gene

 Amp 


PCR System 9600);电泳仪(型号:DYY一6C型);水 


平电泳槽(型号:DYCP一31 B);垂直板电泳槽(型号:

 


近年来有关黄牛、牦牛等的GHRH基因 的多 


态性及与生产性能的关联分析等已有相关的研究报 


道l

 。 ,但在信阳水牛上,至今尚未见有关GHRH 


基因影响其生产性能的报道,本研究运用PCR—SS—

 


DYCZ一2 OA);凝胶成像系统(型号:UVP GDS一

 


8000)。

 


1.2

 实验方法 


1.2.1 D NA提取与检测 

采用传统的氯仿提取 


法 

提取信阳牛 血样基因组

DNA,提取后的 


CP结合测序的方法,对信阳水牛的GH RH基因的 


第二外显子进行突变检测,以期为进一步进行生产 


性状的关联分析,发现与重要经济性状相关的DNA 

DNA用TE缓冲液溶解后,采用0.5

 琼脂糖凝胶 


分子遗传标记,对信阳水牛的遗传育种改良以促进 


水牛业的发展具有极其重要的意义。

 


电泳检测和紫 外分光光度计测定浓度后,一80℃保存 


备用。

 

1.2.2 PCR引物的设计与合成 参照NCBI(Na—

 


t i

onal

 Center

 f

or

 Bi

otechnol

ogy Inf

ormat

< p>i

on)数据 


库中公布的GHRH基因序列(gi:194719 389)以及 


外显子序列,利用Pri

mer 5.0软件自行设计G HRH 


基因的第二外显子序列的PCR扩增引物,由上海生 


物工程技术服务有限公司进行引物合成,序列信息 


见表1。

 


材料与方法 


1.1

 实验材料 


1.1.1

样本

采集共计56头均无血缘关系的信阳 


水牛(旱)的静脉血液,加入抗凝剂ACD摇匀(血液:

 

ACD=6:1),用加冰块的泡沫箱带回试验室,一20 


℃低温冷冻保存备用。

 


引物序列信息 

< br>在PCR反应为15“L体系,具体如下:2×Re—

 


acti

on Mi

x 7.5ⅡL、Gol

den Taq DNA聚合 酶(5 U/

 


L)0.1

 uL、引 物GHRH2S(上游引物,10 p.

mol

/ 


L) 0.1

 L、引物GHRH2A(下游引物,10 f

mol/ L)

 


迅速倒人玻璃板内,插入梳子;室温下凝胶约

30  


mi

n后,小心拔出梳子,立即用蒸馏水立刻冲洗点样 


孔,取出橡胶条,将注有胶的玻璃板放到垂直电泳槽 


内,加入电泳缓冲液; 取4 L PCR产物,加6 L变 


性缓冲液,瞬时离心后PCR仪中98℃变性10  mi

n;

 


取出变性后的PCR产物立即埋入冰中,冰 浴5

 mi

n 


后迅速上样,并作好点样顺序记录,冰浴 条件下250 


V电压电泳20 mi

n,而后16O V电压电泳20  h;取 


0.1

 L、无菌水6.2 L、DNA模板(1 g/ L )1.0 


L。按照如下条件进行扩增:95℃预变性10 mi

n;< /p>

 


94℃变性30 S,63.4℃退火4O S,72。

C延伸30 s,

 


循环32次。

 

1.2.3 PCR结果的琼脂糖电泳检测 

2.0“L 


凝胶:电泳结束后切断电源,卸下胶板,将凝胶从玻 


PCR产物,点样于1. 5

 琼脂糖(0.21 g琼脂糖,16

 


mL 1×T BE缓冲液)凝胶胶孑L中,120 V电压,电泳 


约35 mi

n, EB(溴化乙啶)染色,紫外灯下观察电泳 


结果,并用凝胶成像系统拍照保存。

 


1.2.4 PCR产物的SSCP检测 洗净烘干玻璃 

< br>板,

两板侧边用夹子夹紧,底部用

1%的琼脂糖封 


住,放置5 mi

n;将现配的、混匀的8 的PAGE凝胶 


璃板中 小心取出,用蒸馏水漂洗2次(每次2O s);银 


染凝胶:将染色液(0.1 

AgNO。)倒入塑料盘中浸 


没凝胶,放在摇床上避光轻轻摇30 mi< /p>

n,凝胶用蒸 


馏水漂洗2次;凝胶显色:加入显色液至浸没凝胶,

 


边摇边观察,直到凝胶上显现出清晰的电泳带;终止 


显色:倒出显色液,用蒸馏水漂洗两次;

凝胶照相:将 


凝胶用凝胶成 像系统进行拍照,并作好记录。

 

大学生有哪些创业项目-大学生有哪些创业项目


大学生实习接收函-大学生实习接收函


河北工业大学天津校区-河北工业大学天津校区


一个女大学生的日记-一个女大学生的日记


四川大学学霸-四川大学学霸


大学教授的英语-大学教授的英语


西安交通大学统计学-西安交通大学统计学


对外经贸大学在哪-对外经贸大学在哪



本文更新与2020-11-27 23:58,由作者提供,不代表本网站立场,转载请注明出处:https://bjmy2z.cn/daxue/11221.html

信阳水牛GHRH基因第二外显子的SNPs检测的相关文章