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华中农业大学本科课程考试
参考答案与评分标准
考试课程
：
基因操作原理
学年学期：
2003-2004-2
试卷类型：
A
考试时间：
2004-05-18
一、填空题
（每小题
2
分，共
24
分）
1.
限制性内切酶的命名主要根据
__
产生该酶的接种的拉丁文缩写（也可以 写“属名的第
1
个字母种
名前两字母”
）
_
_
来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确
< p>_A
，
C
（多选少选均不给分）
< p>_
。
A:
Sal
I;
B: SmaI;
C:
Hin
dIII;
D:
Hind
III; E: T
th
111I; F:
Bsp1286
I; G:
NotI
2.
RNA polymerase
可识别启动子并启动基因的转录从而合成
mRNA
，
_
S1
酶作图
_
和
Primer
extension (
此题答案是唯为一的
)
_
方法可用来检测
mRNA
合成的起始位置。
3.
在分子克隆常用的
菌株中
Dam
和
Dcm
甲基化酶都是有活性的，它们可在
DN A
的特定位
点作甲基化修饰，而许多限制性内切酶位点对甲基化是敏感的
，如
Cla
I (AT/CGAT)
。请问
Cla
I
能
（
多选少选均不给分
）
。
（
A
）
切割以下哪个或哪些来自
dam
+
dcm
+
菌株的
DNA
序列
ABD
ATCGATA;
（
B
）
ATCGATG;
（
C
）
ATCGATC;
（
D
）
ATCGATT.
4.
从高温嗜热细菌中发现高温
DNA polymerase
后，使得
PCR
技术得以广泛应用，在高温 下有活性
的
DNA polymerase
有
< p>Taq
_
、
Vent
、
_
Pwo
,
、
__
Pfu
__
还有
Tli, Tth
。其中具有
3’-5’
外切活性的高温
DNA pol
ymerase
有
_
_
Vent
_
和
_
Pwo
。
(
或
Pfu
)
5.
DNase I
切割
DNA
的方式受条件的影响
,
在
Mn++
存在下
__
DNA< /p>
双链相结的位置切割
_
，
在
Mg++
存在下
随机切割
。
6.
限制性内切酶有其特定的识别位点，
如
Eco
RI
的识别位点为
_
GAATTC
；
Bam
HI
_
限制性内切酶
与
_
Sau
3AI (
或其它，只要同尾
)
_
限制性内切酶 切割
DNA
形成的末端相同。
7.
Lambda phage
的基 因组在噬菌体颗粒中是
____
线状的
___
，在 感染宿主细胞后主要以
_
环状
形式
存在。
8.
Sequenase
是用于
_DNA
测序
___
的工具，与
__
_T7__
Polymerase
< p>_
最相似，但不同之处在于
___
前者去除了绝大部
分
3’-5’
外切活切
_
。
9.
在基因操作过程中有许多对人体有害的物质
,
应小心使用
,
常用的有害物质有
:
苯酚
__, ___
同位
素
_, __EB__, _ SDS__
。
（只要写出一种化合物即可）
10.
Splicing by overlap extension
是一种
_ PCR _
__
工作方式，可用于对两个
DNA
片段作
_
___
定点
__
连接。
service@
11.
Competent cells
是一种处于
_
_
能高效吸收
DNA
状态的细胞
, electroporation
是指一种将
_
DNA
_
（物质）通过
__
_
电击
__
方式
_____
转移
DNA
的
__
遗传转移方法。
12.
用于基因克隆的载体种类繁多，
从克隆片段的大小来看，
可分为常规克隆载体和大容量克隆载体。
常见的
大容量克隆载体有
__
BAC
，
_ PAC _
，
_YAC__
，
___ Cosmi d(
写
FAC
亦可
)
__
。
二、
名词解释
（每小题
3
分，共
24
分）
< p>
1
．
Klenow fragment
①是一种
DNA
聚合酶性（
1’
）
②具有
5’-3’
聚合酶性（
0.5’
）
③具有
3’-5’
外切活性（
0.5’
）
④来自
DNA
poly merase
经枯草杆菌蛋白酶的水解的大片段（
1’
）
2. BAC vector
①一种克隆载体即细菌人工染色体载体（
1’
）
< p>
②由
F
质粒改造而来即使用了
F
质粒 的复制结构（
0.5’
）
③可装载大的
DNA
片段（
100kb
）
（
0.5’
）
④拷贝数低，可避免共转化，体
内重组（
1’
）
3. CIP
①牛小肠碱性磷酸酶（
1’
）
②可去除段
5’
磷酸基
DNA
片因 （
1’
）
③使
5’
端变成
-OH
，可用于防止基因克隆中载体自连（
< p>1’）
4.
IPTG/X-gal
①都是乳糖的衍生物（
1’
）
②可用于克隆载体的
a
-
互补筛选（
1’
）
③
IPTG
可作为乳糖操纵子的诱导物，但不能用作底物（
0.5’
）
④
X-gal
可作 为乳糖操纵子的底物，但不能用作诱导物（
0.5’
）
5. M13KO7
①是
M13
噬菌体的突变体（
0.5’
）
②其基因
II
发生了突变，产物优先作用于
W ild type M13
噬菌体间隔区（
1.5’
）
③用作
phagemid
制备单链
DNA
的辅助噬菌体（
0.5’
）
6. Site preference
①位点偏爱（
1’
）
< br>②限制性内切酶对同一
DNA
底物中不同酶切位点表现出的偏向性切割现象 （
2’
）
7. Nick translation
service@
①切口平移（
0.5’
）
②一种用于
DNA
标记的方法（
0.5’
）
③利用
E. coli
polymerase I
具有
5’-3’
外切活 切，从
DNA
切口处切割
DNA
，然后在
5’-3’
合成活性的
作用下再合成
DNA
。在合成过程中，掺入标记的
dNTP
，起到标记
DNA
的作用（
2’
）
8. Plateau effect ( in PCR)
①平台效应（
1’
）
< br>②在
PCR
反应后期出现（
1’
）
③扩增的
DNA
产物不再以指数方式递增（
1’
）
三、分析简答题
（每小题
5
分，共
25
< p>分）
1
．当利用质粒载体从基因组中克隆得到含有目标基
因的
DNA
片段后，通过限制性内切酶切割该重组
DNA
可制作该目标
DNA
片段的物 理图谱。
例如，
选
用
3
种内切酶切割重组
pBlue-A
，通过
agarose
电泳
分析，得到如下大小的<
/p>
DNA
片段。请标出酶切位点
A
的相对位置。
Eco
RI
：
10kb
Hin
dIII
：
10kb
A
酶：
4kb, 3.5kb, 2.5kb
Hin
dIII
和
Eco
RI
：
4kb, 6kb
A
酶和
Eco
RI
：
3.5kb, 2.5kb, 2.5kb, 1.5kb
A
酶和
Hin
dIII
：
4kb, 2.5kb, 1.0kb, 2.5kb
A(8.5kb) A(5.0kb) A(2.5kb)
2
．右图是一个常用克隆载体的遗
传图谱。请问该载体有何主要特
点，利用该特点可作何用途，举出
一种构建该特点的方法。
①是一个常用的克隆载体的衍生物
（
0.5’
）
②呈线状而非环状（
0.5’
）
③在载体
3’
未端各有一个< /p>
T
的突出端（
1’
）
④用于克隆
Taq polymerase
的
PCR
产物（
1.5’
）
⑤未端转移酶
+ddTTP
（
1.5’
）
EcoRI
10000/0
9000
1000
8000
2000
pBlue-A
10000 bps
7000
3000
600
HindIII
5000
4000
service@